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<article-title xml:lang="es"><![CDATA[Transmisión congénita de la enfermedad de Chagas en el Paraguay]]></article-title>
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<abstract abstract-type="short" xml:lang="en"><p><![CDATA[ABSTRACT The current strategies recommended for the diagnosis of congenital Chagas disease require the conventional serological diagnosis in pregnant women to detect their infection and the parasitological confirmation in the congenitally infected newborns. The detection of parasites in blood is not a method easy to apply at large scale and at public health level. Therefore, the conventional serology is recommended, i.e. detection of anti-T.cruzi IgG in infants older than eight months of age. Considering these recommendations, our group has designed operative strategies in endemic rural areas that allow the rapid detection and treatment of congenitally infected infants. We have demonstrated that the decentralization of the serological studies from the Regional Hospitals contributes to the fast identification of the infected women together with the registration of their infection status in the family, prenatal and pediatric files. The results of over fifteen years of study of our group indicate that, in spite of the high sensitivity of PCR, its use with diagnosis purposes is very complex at large scale and in rural areas. However, the polymerase chain reaction (PCR) technique is very useful to evaluate the treatment of infected children. The conventional IgG serology allows the unequivocal detection of congenitally infected infants after eight months of age (maximum time observed for the clearance of maternal antibodies). However, this strategy makes that the time required to rule out a congenital transmission in the follow-up diminishes adherence with an important loss of children that are not brought to control. The detection of congenital transmission cases increases remarkably when a combination of the conventional serological techniques and an ELISA that we designed with the recombinant protein "shed acute phase antigen" (SAPA) is used, allowing the unequivocal detection of congenitally infected children at three months of age.]]></p></abstract>
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</front><body><![CDATA[ <p align="right"><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">TEMA DE ACTUALIDAD</font></p>     <p>&nbsp; </p>     <p><font size="4" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><b>Transmisión congénita de la enfermedad de Chagas en el Paraguay</b></font></p>     <p>&nbsp; </p>     <p><font size="3" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><b>Congenital transmission of Chagas disease in Paraguay</b></font></p>     <p>&nbsp; </p>     <p>&nbsp; </p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><b><a name="autor"></a></a><a href="#corres">*</a>Russomando G</b></font></p>      <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">Departamento de Biología Molecular y Genética, Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Asunción. Asunción-Paraguay</font></p>     <p>&nbsp; </p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p>&nbsp; </p> <hr size "1" noshade>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><b>RESUMEN</b></font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">Las  estrategias actuales recomendadas para el diagnostico de la infecci&oacute;n cong&eacute;nita  chag&aacute;sica requieren del diagn&oacute;stico serol&oacute;gico convencional en mujeres  embarazadas para detectar su infecci&oacute;n y la confirmaci&oacute;n parasitol&oacute;gica en  reci&eacute;n nacidos infectados verticalmente. La detecci&oacute;n de par&aacute;sitos en sangre no  resulta un m&eacute;todo f&aacute;cil de aplicar a gran escala y a nivel de salud p&uacute;blica por  lo que se recomienda finalmente la serolog&iacute;a convencional, es decir la  detecci&oacute;n de IgG anti-<i>T. cruzi</i> en  infantes mayores a 8 meses de edad. Teniendo en cuenta estas recomendaciones  nuestro grupo ha dise&ntilde;ado estrategias operativas en &aacute;reas rurales end&eacute;micas que  permiten la r&aacute;pida detecci&oacute;n y tratamiento de infantes infectados  cong&eacute;nitamente. Demostramos que la descentralizaci&oacute;n de los estudios  serol&oacute;gicos de los grandes Hospitales Regionales ayuda a la r&aacute;pida  identificaci&oacute;n de las mujeres infectadas, como tambi&eacute;n el registro de su estado  de infecci&oacute;n en las fichas familiares, prenatal y pedi&aacute;trica. Los resultados de  m&aacute;s de 15 a&ntilde;os de estudio de nuestro grupo, indican que a pesar de la alta  sensibilidad de la t&eacute;cnica reacci&oacute;n en cadena de la polimerasa (PCR), resulta  muy complejo su empleo con fines de diagn&oacute;stico a nivel rural y en gran escala,  siendo muy &uacute;til para evaluar el tratamiento realizado en los ni&ntilde;os infectados. La serolog&iacute;a  convencional permite la detecci&oacute;n inequ&iacute;voca de anticuerpos del tipo IgG en  infantes infectados cong&eacute;nitamente despu&eacute;s de los 8 meses de edad (tiempo  m&aacute;ximo observado para el <i>clearence</i> de  anticuerpos maternos). Sin embargo esta estrategia hace que el tiempo requerido  en el seguimiento para descartar transmisi&oacute;n cong&eacute;nita disminuya la adherencia  durante el periodo de seguimiento con una importante p&eacute;rdida de ni&ntilde;os que no  son tra&iacute;dos al control. La detecci&oacute;n de casos de transmisi&oacute;n cong&eacute;nita aumenta  notablemente cuando se utiliza una combinaci&oacute;n de las t&eacute;cnicas serol&oacute;gicas  convencionales y un ELISA que hemos dise&ntilde;ado con el ant&iacute;geno recombinante de  fase aguda, “shed acute phase antigen” (SAPA) que permite la detecci&oacute;n  inequ&iacute;voca de infantes infectados cong&eacute;nitamente a los 3 meses de edad.</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"> <b>Palabras claves</b>:Enfermedad  de Chagas, transmisi&oacute;n cong&eacute;nita, SAPA, Paraguay.</font></p> <hr size "1" noshade>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><b>ABSTRACT</b></font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">The current strategies recommended for the diagnosis of congenital Chagas disease require the conventional serological diagnosis in pregnant women to detect their infection and the parasitological confirmation in the congenitally infected newborns. The detection of parasites in blood is not a method easy to apply at large scale and at public health level. Therefore, the conventional serology is recommended, i.e. detection of anti-T.cruzi IgG in infants older than eight months of age. Considering these recommendations, our group has designed operative strategies in endemic rural areas that allow the rapid detection and treatment of congenitally infected infants. We have demonstrated that the decentralization of the serological studies from the Regional Hospitals contributes to the fast identification of the infected women together with the registration of their infection status in the family, prenatal and pediatric files. The results of over fifteen years of study of our group indicate that, in spite of the high sensitivity of PCR, its use with diagnosis purposes is very complex at large scale and in rural areas. However, the polymerase chain reaction (PCR) technique is very useful to evaluate the treatment of infected children. The conventional IgG serology allows the unequivocal detection of congenitally infected infants after eight months of age (maximum time observed for the clearance of maternal antibodies). However, this strategy makes that the time required to rule out a congenital transmission in the follow-up diminishes adherence with an important loss of children that are not brought to control. The detection of congenital transmission cases increases remarkably when a combination of the conventional serological techniques and an ELISA that we designed with the recombinant protein “shed acute phase antigen” (SAPA) is used, allowing the unequivocal detection of congenitally infected children at three months of age.</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><b>Keywords:</b> Chagas diseases, congenital transmission, SAPA, Paraguay.</font></p> </p><hr size "1" noshade>     <p>&nbsp; </p>     <p>&nbsp; </p>     <p><font size="3" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><b>INTRODUCCI&Oacute;N</b></font></p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">La transmisi&oacute;n  cong&eacute;nita ocurre en todas las regiones end&eacute;micas de Am&eacute;rica Latina y depende  directamente de la infecci&oacute;n en las mujeres en edad f&eacute;rtil, quienes han  adquirido la infecci&oacute;n con el <i>Trypanosoma  cruzi</i> mayormente por transmisi&oacute;n vectorial (1). Se estima que aproximadamente  15.000 infantes nacen infectados anualmente por transmisi&oacute;n vertical en Am&eacute;rica  Latina, y que el n&uacute;mero de mujeres seropositivas de 15 a 44 a&ntilde;os es de alrededor  de 1.809.507 (2,3). Los grandes avances logrados por los pa&iacute;ses end&eacute;micos en el  control de las otras v&iacute;as de transmisi&oacute;n, vectorial y transfusional, han  permitido una notable reducci&oacute;n en el n&uacute;mero de casos agudos por a&ntilde;o, mientras  que las infecciones por transmisi&oacute;n vertical seguir&aacute;n siendo una fuente  importante de transmisi&oacute;n en los futuros 20 a 30 a&ntilde;os.  La prevenci&oacute;n de la transmisi&oacute;n vertical de <i>T. cruzi</i> no es posible hasta la fecha, pero el infante infectado  puede ser detectado a tiempo y el tratamiento es muy efectivo, los ni&ntilde;os se  curan en un 100% cuando son detectados a edades inferiores al a&ntilde;o (1,4). </font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">En Paraguay, en los a&ntilde;os 1996 a 1998 a trav&eacute;s de un proyecto  financiado por el TDR/OMS (5), logramos implementar un sistema de diagn&oacute;stico  prenatal de infecci&oacute;n por <i>T. cruzi</i> en  dos departamentos end&eacute;micos para la enfermedad de Chagas, Cordillera y  Paraguar&iacute;. Este proyecto ten&iacute;a como objetivo desarrollar un sistema sostenible  en el tiempo, que permitiera detectar y aconsejar a mujeres embarazadas  seropositivas para <i>T. cruzi</i> y al  mismo tiempo diagnosticar y tratar en forma oportuna a ni&ntilde;os infectados  cong&eacute;nitamente en &aacute;reas rurales end&eacute;micas. </font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">La metodolog&iacute;a desarrollada  estrat&eacute;gicamente, gracias a evaluaciones peri&oacute;dicas de control y seguimiento,  logr&oacute; incorporarse al sistema de salud en 37 municipios de ambos departamentos,  y el sistema funciona sin interrupciones hasta la fecha. En los &uacute;ltimos 15  a&ntilde;os, las Regiones Sanitarias de Paraguar&iacute; y Cordillera incorporaron un sistema  de diagn&oacute;stico universal para la enfermedad de Chagas durante el control  prenatal, y han detectado y aconsejado a 9.998 mujeres seropositivas para <i>T. cruzi</i> en edad f&eacute;rtil de un total de  90.946 mujeres embarazadas analizadas (48.080 en Cordillera y  42.866 en Paraguar&iacute;). En  los primeros 5 a&ntilde;os, las prevalencias para la enfermedad de Chagas en el grupo et&aacute;reo  (15 a&ntilde;os a 45 a&ntilde;os) eran de 15% y 12% en Cordillera y Paraguar&iacute;,  respectivamente. Sin embargo, en los &uacute;ltimos 5 a&ntilde;os se ha notado un descenso  muy importante, valores de 8% a 6% (ver <a href="#a09t1">tabla 1A y B</a>), atribuy&eacute;ndose este  descenso a las acciones de control vectorial iniciadas en el a&ntilde;o 1999 en forma  continua en el tiempo y contigua geogr&aacute;ficamente en toda la regi&oacute;n oriental del  Paraguay y al tamizaje serol&oacute;gico en bancos de sangre que alcanz&oacute; el 100% de  cobertura para en el a&ntilde;o 1995 en lo referente a Chagas. Cabe destacar que toda mujer  seropositiva detectada durante el prenatal no ingresa al tamizaje serol&oacute;gico en  embarazos posteriores debido a que ambos departamentos est&aacute;n libres de  transmisi&oacute;n domiciliar por <i>Triatoma  infestans.</i> Se estima que hasta la fecha el sistema ha evaluado  serol&oacute;gicamente al 70% de las mujeres en edad f&eacute;rtil de ambos departamentos. Adem&aacute;s, se ha dise&ntilde;ado al mismo  tiempo una estrategia para &aacute;reas rurales end&eacute;micas de diagn&oacute;stico, tratamiento,  y seguimiento control pos tratamiento de ni&ntilde;os infectados cong&eacute;nitamente con <i>T. cruzi.</i> Este sistema ha permitido  analizar pasivamente 6.937 infantes de madres seropositivas desde 1998 hasta la  fecha y 354 ni&ntilde;os infectados cong&eacute;nitamente han sido tratados con la droga  benznidazole. En el a&ntilde;o 1998, luego de una evaluaci&oacute;n interna de proceso, buscamos una alternativa diagn&oacute;stica.  Esto &uacute;ltimo se debi&oacute; a que la serolog&iacute;a convencional para el diagn&oacute;stico precoz  no era oportuna y adem&aacute;s la t&eacute;cnica molecular PCR (reacci&oacute;n en cadena de la  polimerasa) (6) no era aplicable para diagn&oacute;stico a nivel de salud p&uacute;blica en  pa&iacute;ses end&eacute;micos (7). Por lo anteriormente expuesto, desarrollamos un test de  ELISA con la prote&iacute;na recombinante shed acute phase antigen (SAPA) (8-11) que  permite detectar a ni&ntilde;os entre 3 y 8 meses de edad infectados cong&eacute;nitamente, y  desde el a&ntilde;o 2001 hasta la fecha se emplea dentro del tamizaje de rutina a  todos los infantes de madres seropositivas.</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">Concluimos que la combinaci&oacute;n de la  serolog&iacute;a convencional (ELISA) y la t&eacute;cnica ELISA-SAPA son t&eacute;cnicas suficientes  para efectuar un diagn&oacute;stico precoz y de certeza, a partir de los 3 meses de  edad, en un programa de control de transmisi&oacute;n cong&eacute;nita de la enfermedad de  Chagas en zonas end&eacute;micas para la infecci&oacute;n con <i>T. cruzi.</i></font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">En el presente trabajo  describimos la metodolog&iacute;a utilizada para implementar el sistema y los  resultados obtenidos hasta la fecha.</font></p>     <p>&nbsp;</p>     <p align="center"><a name="a09t1"></a><img src="/img/revistas/iics/v7n2/a09t1.jpg"></p>     <p>&nbsp;</p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><b>ESTRATEGIAS IMPLEMENTADAS</b></font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><b>Incorporaci&oacute;n a los servicios de Puestos, Centros de Salud y Hospitales Regionales el diagn&oacute;stico de la  enfermedad de Chagas dentro del control prenatal en forma universal</b></font></p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">Los dos departamentos seleccionados, por ser end&eacute;micos  para la enfermedad de Chagas en la regi&oacute;n Oriental del Paraguay, fueron  Cordillera y Paraguar&iacute;. Estos departamentos est&aacute;n divididos en 20 y 17  distritos respectivamente. La poblaci&oacute;n seg&uacute;n el Censo Nacional del a&ntilde;o 2002 en  estos departamentos era de 233.854 y 221.932 habitantes, con 44.864 y 50.538  mujeres de 15 a  49 a&ntilde;os de edad en Cordillera y Paraguari, respectivamente (censo nacional  2002), ver tabla 2. Se  descentraliz&oacute; para este estudio a los dos grandes Hospitales Regionales de los  dos departamentos end&eacute;micos creando 9 puntos estrat&eacute;gicos de an&aacute;lisis laboratorial equidistantes a los 37  municipios existentes. En la evaluaci&oacute;n de proceso de los primeros 3 a&ntilde;os, los  laboratorios implementados en este programa hab&iacute;an logrado que 40 servicios sanitarios, Puestos y Centros de  Salud rurales, de dif&iacute;cil acceso y distantes, remitieran para el control  serol&oacute;gico 27.626 muestras de mujeres embarazadas desde julio de 1995 a julio de 1998, en  forma sistem&aacute;tica, ininterrumpida y localmente sustentable, logrando un 80% de  cobertura a nivel prenatal y detect&aacute;ndose 3.824 mujeres infectadas. Hab&iacute;amos  incorporado un sistema de control de calidad en cada laboratorio con monitoreos  mensuales, detectando valores falsos negativos del orden 0,29% y 0,6%, y falsos positivos de 0,9% y  0,69%, en Cordillera y Paraguar&iacute; respectivamente, adem&aacute;s cada tres meses  particip&aacute;bamos en las reuniones de gesti&oacute;n de cada Regi&oacute;n Sanitaria. Estas  actividades permitieron una activa retroalimentaci&oacute;n con el 100% de los  servicios de salud involucrados durante los tres primeros a&ntilde;os. Se adiestraron  funcionarios entre bioqu&iacute;micos y auxiliares de enfermer&iacute;a como laboratoristas  de los Centros de Salud y de los 3 Hospitales Regionales; estos encargados eran  responsables de los estudios serol&oacute;gicos e interpretaci&oacute;n de resultados para la  detecci&oacute;n de anticuerpos anti-<i>T. cruzi</i> por la t&eacute;cnica de ELISA, empleando un reactivo de producci&oacute;n local (Chagas Kit,  IICS) (12). Adem&aacute;s, incorporamos en simult&aacute;neo estudios de s&iacute;filis (VDRL  (aglutinaci&oacute;n de part&iacute;culas de l&aacute;tex para la detecci&oacute;n de anticuerpos anti- <i>Treponema pallidum</i>) en los mismos sueros  de embarazadas. Mensualmente nuestro equipo realizaba visitas de supervisi&oacute;n,  todas las muestras deb&iacute;an de estar congeladas en microtubos, y en Asunci&oacute;n  (IICS-UNA-Laboratorio de Biolog&iacute;a Molecular) se llevaba a cabo el control de  calidad.</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><b>Control  de calidad a los laboratorios rurales</b></font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">Fue fundamental para el empoderamiento  y la sostenibilidad del programa el control de calidad realizado en forma  cruzada durante los dos primeros a&ntilde;os. Este control consisti&oacute; en evaluar el  100% de los sueros que arrojaban resultados positivos en los 8 laboratorios, el  100% de los dudosos y un promedio del 15% al 20% de los negativos. De acuerdo a  nuestra evaluaci&oacute;n inicial el n&uacute;mero de resultados discordantes, falsos  positivos y negativos, no se debieron a problemas de interpretaci&oacute;n de la  t&eacute;cnica del Kit IICS-ELISA-Chagas (12), los errores eran mayormente al  transcribir los resultados. Este problema fue disminuyendo mediante la  constante comunicaci&oacute;n entre el personal del IICS y los laboratorios rurales. Con respecto a las muestras dudosas,  podemos decir que fueron muy pocas y se presentaron en los tres primeros meses,  producto de la inexperiencia de los t&eacute;cnico a pesar de que se emplea un kit de  ELISA que no requiere de equipos para su lectura (la interpretaci&oacute;n es  colorim&eacute;trica y se realiza a simple vista). Cabe destacar que en zonas  end&eacute;micas, entre el 1% y 2% de las muestras serol&oacute;gicas, especialmente en  adultos, son “<i>borderline”</i> y requieren  de una segunda muestra de sangre.</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><b>Apoyo  al Programa de s&iacute;filis cong&eacute;nita</b></font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">Desde el inicio se incorpor&oacute; al  sistema, el diagn&oacute;stico de s&iacute;filis por la t&eacute;cnica de VDRL, t&eacute;cnica que estaba  centralizada en los dos Hospitales Regionales ubicados en las cabeceras  departamentales hasta el a&ntilde;o 1996 y no lograba la cobertura departamental. En  los a&ntilde;os 1997 y 1998 ya se observ&oacute; una cobertura de m&aacute;s del 90% en el control  serol&oacute;gico prenatal seg&uacute;n datos registrados en los informes anuales de  Servicios Prestados del Ministerio de Salud P&uacute;blica y Bienestar Social, en  donde se destacaban estas dos Regiones Sanitarias con respecto a las dem&aacute;s. El  control serol&oacute;gico para Chagas, practicado a nivel de Puestos y Centros de  Salud durante el control prenatal, ha influido indirectamente en el aumento de  la cobertura de s&iacute;filis a nivel departamental. La adherencia al sistema se  debi&oacute; en gran parte a que los servicios de salud distantes pod&iacute;an acceder a  los resultados serol&oacute;gicos semanalmente. </font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><b>Resultados  epidemiol&oacute;gicos: aplicaci&oacute;n de un cuestionario durante el primer a&ntilde;o de  implementaci&oacute;n del programa, 1996   a 1997</b></font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">El an&aacute;lisis de los cuestionarios empleados en el programa, permitieron demostrar que, entre el 80% y 85% de las  embarazadas estudiadas nunca salieron de sus respectivos departamentos, y que  el 68% y el 74% de las mismas, en Cordillera y Paraguar&iacute; respectivamente,  siempre vivieron en el mismo distrito; en estos grupos se detect&oacute; el mayor  porcentaje de seropositividad para la enfermedad de Chagas. Entre las  embarazadas que asistieron al control pre-natal, el rango de edad mayoritario  fue de 20 a  30 a&ntilde;os. Se observ&oacute; que la seroprevalencia de anticuerpos anti-<i>T. cruzi</i> aumentaba con la edad (entre  24% y 28% de infecci&oacute;n en mujeres con edad igual o mayor a 41 a&ntilde;os). Esto  &uacute;ltimo indicaba que la infestaci&oacute;n de las casas con <i>Triatoma infestans</i> era bastante antigua en ambas poblaciones, pero  los riesgos de infecci&oacute;n continuaban hasta el a&ntilde;o 1996 teniendo en cuenta que  entre las j&oacute;venes de 12 a  19 a&ntilde;os de edad se detect&oacute; una infecci&oacute;n del 11%. El 39% de las mujeres  analizadas hab&iacute;an tenido m&aacute;s de tres embarazos, entre ellas el 45% eran mujeres  seropositivas con m&aacute;s de tres hijos, lo cual situaba a ambos departamentos en  un alto riesgo de transmisi&oacute;n cong&eacute;nita. No observamos una relaci&oacute;n directa  entre el n&uacute;mero de abortos y la seropositividad para la enfermedad de Chagas,  aunque las mujeres seropositivas con m&aacute;s de dos hijos, a diferencia de las  seronegativas, declaraban haber tenido al menos un aborto. Los 2 distritos  cabecera departamentales (con mayor poblaci&oacute;n) presentaban las seroprevalencias  para Chagas m&aacute;s bajas del 8% al 11%, en el 50% de los distritos restantes las  prevalencias eran elevadas, alrededor del 20%, y en distritos como Emboscada y  Nueva Colombia del Dpto. Cordillera las prevalencias eran las m&aacute;s altas  alcanzando el 38% a nivel distrital. </font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><b>Desarrollo de una estrategia de diagn&oacute;stico  temprano de la infecci&oacute;n por <i>T. cruzi</i> en infantes de madres seropositivas para Chagas detectadas durante el control  prenatal</b></font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">En el  a&ntilde;o 2005 hemos publicado un art&iacute;culo donde describimos las t&eacute;cnicas de  diagn&oacute;stico para  detectar transmisi&oacute;n cong&eacute;nita de la enfermedad de Chagas basada en un estudio  a gran escala que permite demostrar las deficiencias de las t&eacute;cnicas de  diagnostico serol&oacute;gico y parasitol&oacute;gico(6). En forma breve, se examinaron 1.865 infantes de madres  seropositivas por t&eacute;cnicas parasitol&oacute;gicas como, observaci&oacute;n directa al  microscopio y reacci&oacute;n en cadena de la polimerasa; y por t&eacute;cnicas serol&oacute;gicas  como ELISA, ELISA-SAPA e IFI. Se detectaron 104 ni&ntilde;os infectados y todos ellos  fueron tratados con benznidazole. La estrategia de solicitar una sola muestra  de cada ni&ntilde;o de madre seropositiva en vez de dos muestras una al nacer y otra a  los 6 meses de edad, result&oacute; m&aacute;s eficiente y con menor p&eacute;rdida de ni&ntilde;os. La  t&eacute;cnica PCR ha resultado ser la m&aacute;s sensible para la detecci&oacute;n temprana de  reci&eacute;n nacidos infectados, pero no recomendamos su empleo como t&eacute;cnica de  diagnostico a nivel de salud p&uacute;blica de &aacute;reas rurales end&eacute;micas. Esto &uacute;ltimo se  debe a que fue necesario realizar alrededor de 2000 reacciones de PCR para  analizar 815 infantes, entre duplicados, controles y repeticiones, permitiendo  detectar 60 infantes infectados. Entre los 815 infantes analizados por PCR se  encontr&oacute; que 7 infectados, con serolog&iacute;a positiva posterior a los 8 meses, no  pudieron ser detectados por esta t&eacute;cnica. </font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">La detecci&oacute;n de beb&eacute;s infectados por  transmisi&oacute;n cong&eacute;nita a la edad de 6 meses, ha sido muy recomendada por  diversos autores, sin embargo hemos detectado algunas desventajas al querer  hacer el diagn&oacute;stico a los 6 meses de edad: i) en zonas end&eacute;micas el 41% de los  reci&eacute;n nacidos de madres seropositivas para <i>T.cruzi</i> poseen t&iacute;tulos altos de anticuerpos  maternos circulantes, (35%, 1/320 y 6 %, 1/640) lo que conlleva a un  diagn&oacute;stico falso positivo de transmisi&oacute;n cong&eacute;nita porque el 8% de los ni&ntilde;os  de 6 meses de edad a&uacute;n presentan anticuerpos maternos, ii) s&oacute;lo el 23%  presentan anticuerpos detectables del tipo IgM tanto por ELISA, como por IFI, y  iii) existe un 2% de infantes infectados que no desarrollan anticuerpos  detectables por t&eacute;cnicas convencionales (ser&iacute;an falsos negativos).</font></p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">En enero de 1998 se iniciaron los  trabajos con el ant&iacute;geno recombinante SAPA.  El Dr. Carlos Frasch, del Instituto de Investigaciones Biotecnol&oacute;gicas  de la Universidad  de San Mart&iacute;n, Argentina, cedi&oacute; a  nuestro equipo para fines de investigaci&oacute;n y de salud p&uacute;blica el pl&aacute;smido pGex  con el inserto que codifica para el ant&iacute;geno recombinante SAPA. Hasta la fecha  producimos este ant&iacute;geno recombinante empleando en la purificaci&oacute;n columnas de  glutati&oacute;n (no observamos interferencias con prote&iacute;nas de <i>E. coli).</i> El protocolo para  el ELISA-SAPA fue estandarizado en el  departamento de Bioqu&iacute;mica y Producci&oacute;n del IICS, empleando todos los reactivos  del kit convencional ELISA-Chagas-IICS.</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">En las <a href="#a09t2">tablas 2</a> y<a href="#a09t3">3</a>, se describe el  n&uacute;mero de infantes evaluados para descartar transmisi&oacute;n cong&eacute;nita, por edad,  desde el a&ntilde;o 1998 hasta el 2009, en Paraguar&iacute; y Cordillera.</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">Considerando los resultados obtenidos con las  t&eacute;cnicas convencionales (serol&oacute;gicas-parasitol&oacute;gicas) y los resultados  parciales obtenidos hasta la fecha con el ELISA-SAPA, observamos que la  combinaci&oacute;n de estas dos t&eacute;cnicas serol&oacute;gicas aplicadas en papel de filtro,  ELISA- IgG y ELISA-SAPA-IgG ser&iacute;a suficiente  para efectuar un diagn&oacute;stico precoz y de certeza en ni&ntilde;os menores de seis meses  que residen en &aacute;reas rurales. Nuestro grupo ha publicado recientemente algunos datos  parciales sobre el ELISA-SAPA como parte de una tesis de maestr&iacute;a en Argentina.  En el mes de septiembre de 2010 la revista Expert Review of Molecular Diagnostics publicar&aacute; los resultados de nuestro grupo de la  estandarizaci&oacute;n de la t&eacute;cnica ELISA-SAPA aplicado a 4.500 muestras de infantes  menores de 1 a&ntilde;o, hijos de madres seropositivas. Esta t&eacute;cnica est&aacute; siendo  empleada de rutina desde el a&ntilde;o 2001 en nuestro pa&iacute;s para la detecci&oacute;n temprana  e inequ&iacute;voca de ni&ntilde;os infectados cong&eacute;nitamente desde los 3 meses a 8 meses de  edad.</font></p>     <p align="center"><a name="a09t2"></a><img src="/img/revistas/iics/v7n2/a09t2.jpg"></p>     <p>&nbsp;</p>     <p align="center"><a name="a09t3"></a><img src="/img/revistas/iics/v7n2/a09t3.jpg"></p>     <p>&nbsp;</p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><b>Tratamiento de niños infectados con <i>T. cruzi</i> por transmisión congénita y evaluación pos tratamiento</b></font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">Las embarazadas seropositivas reciben información en el momento de la entrega de resultados. Se le explica sobre los estudios que ella debe solicitar en el futuro, y la importancia del control del bebé a los tres meses de vida. También recibe información sobre el tratamiento que recibirá su hijo en forma gratuita en el caso de que se detecte la infección con <i>T. cruzi</i>, y la importancia del control del tratamiento. El tratamiento de los niños con Chagas congénito lo realiza un pediatra del Hospital Regional, o un médico responsable del puesto o centro de salud del distrito de donde procede la mujer infectada. Se suministra la droga Benznidazole a una dosis de 5 a 10mg/kg peso/día, durante 60 días según la edad del niño.</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">Se han analizado desde 1998 hasta la fecha 6.937 niños de madres seropositivas y se trataron a 354 niños infectados congénitamente con la droga benznidazole (ver tablas <a href="#a09t3">3</a> y <a href="#a09t4">4</a>). En el año 2009 se trataron 32 niños infectados y se confirmó cura parasitológica por negativización de la serología en 56 niños que habían sido tratados cuando tenían entre 3 meses a 8 años de edad y que contaban con un seguimiento de control pos tratamiento  de 2 años a 10 años. La técnica PCR se emplea de rutina en la evaluación pos tratamiento.</font></p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p>&nbsp;</p>     <p align="center"><a name="a09t4"></a><img src="/img/revistas/iics/v7n2/a09t4.jpg"></p>     <p>&nbsp;</p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><b>CHAGAS  CONG&Eacute;NITO EN REGIONES NO END&Eacute;MICAS</b></font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">En el a&ntilde;o 1999 iniciamos un trabajo  similar en el departamento de Alto Paran&aacute;, con el apoyo de la Itaip&uacute; Binacional.  Los resultados obtenidos fueron:</font></p> <ol> <font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">     <li>   Un total de 2.314 mujeres  embarazadas fueron analizadas. En este grupo se detectaron 80 mujeres  seropositivas para <i>T.cruzi</i>. La  seroprevalencia para la enfermedad de Chagas, result&oacute; ser del 3,5%. Se destaca  que tan solo el 31,5% (728 de 2314 mujeres embarazadas) analizadas, nacieron en  el departamento de Alto Paran&aacute;, constat&aacute;ndose una seroprevalencia para <i>T. cruzi</i> muy baja (1,9%) en ese  departamento (14 mujeres seropositivas de 728 mujeres nacidas en Alto Paran&aacute;).  El 57% de las mujeres analizadas no ten&iacute;an m&aacute;s de 5 a&ntilde;os residiendo en el  distrito donde viv&iacute;an en el momento de la encuesta.</li> </font> <font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">    <li> Los distritos en los que se  detectaron mayor n&uacute;mero de mujeres embarazadas infectadas con <i>T. cruzi</i> fueron: Los Cedrales (8,3%),  Itakyry (4,7%), Minga Guaz&uacute; (5,2%), Minga Por&aacute; (4,9%) y JL Mallorqu&iacute;n  (4,8%).</li> </font> <font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">    <li> En cuanto a s&iacute;filis, se observaron  infecciones alarmantes en mujeres embarazadas residentes en Hernandarias  (8,5%), Los Cedrales (8,3%), Pdte. Franco (6,3%), Itakyry (4,7%) y Ciudad del  Este (3,7%). Lo cual fue alertado al sistema de salud. Los casos de infecci&oacute;n  con s&iacute;filis alarmantes se detectan en todas las edades, resaltando un 6 % de  infecci&oacute;n sifil&iacute;tica entre las mujeres de 40 a 49 a&ntilde;os de edad.</li> </font> <font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">    <li> Entre las embarazadas que  asistieron al control pre-natal, el rango de edad 20 a 29 a&ntilde;os fue el m&aacute;s  elevado. El 73% de las mujeres eran menores de 30 a&ntilde;os, y la seroprevalencia en  este grupo era del 2,3%. El mayor n&uacute;mero de mujeres seropositivas para <i>T. cruzi</i> se encontraba en el grupo de  mujeres mayores, de 30 a  49 a&ntilde;os de edad. Teniendo en cuenta que tan solo el 31% de las 2314 mujeres  analizadas nacieron en Alto Paran&aacute; y que 59 mujeres de las 80 mujeres positivas  (74%) provienen de personas que nacieron en otros departamentos, resulta  dif&iacute;cil determinar la antigüedad de la transmisi&oacute;n vectorial en el departamento  de Alto Paran&aacute;.</li> </font> <font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">    <li> Al relacionar los rangos de edad y  el origen (lugar de nacimiento y procedencia) de las mujeres encuestadas  durante el control prenatal, se observ&oacute; que el mayor n&uacute;mero de migrantes se encontraba  en los grupos et&aacute;reos de 30 a  39 a&ntilde;os, (72%) y de 40 a  49 a&ntilde;os, 81%). Los resultados sugieren que la mayor seroprevalencia para Chagas  detectada en estos grupos et&aacute;reos se deber&iacute;a a una infecci&oacute;n contra&iacute;da en los  lugares de nacimiento, y no en el lugar donde viven actualmente, que es en el  departamento de Alto Paran&aacute; considerado hist&oacute;ricamente no end&eacute;mico.</li> </font> <font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">    ]]></body>
<body><![CDATA[<li> Actualmente el  diagn&oacute;stico prenatal de Chagas no es Universal en Alto Paran&aacute;, lo realizan en  los servicios de salud preguntando como factor de riesgo el lugar de nacimiento  de las mujeres embarazadas.</li> </font>    </ol>     <p>&nbsp;</p>     <p><font size="3" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><b>DISCUSION</b></font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">Se propone la realizaci&oacute;n de controles  serol&oacute;gicos de Chagas y s&iacute;filis, rutinarios y sistem&aacute;ticos, en embarazadas  dentro del examen prenatal en departamentos hist&oacute;ricamente end&eacute;micos para  Chagas, ejecutados en forma descentralizada de los grandes hospitales para que  los mismos sean accesibles a toda la poblaci&oacute;n de embarazadas. </font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">La descentralizaci&oacute;n de los estudios  serol&oacute;gicos de los grandes Hospitales Regionales, permitir&iacute;a la r&aacute;pida  identificaci&oacute;n de las mujeres infectadas, como tambi&eacute;n el registro de su estado  de infecci&oacute;n en las fichas familiares, prenatal y pedi&aacute;trica. Estas acciones  deben ser ejecutadas en los puestos y centros de salud de los distritos de  donde provienen, y donde realizan sus controles prenatales, partos,  inscripciones y vacunaci&oacute;n de los beb&eacute;s, permitiendo adem&aacute;s detectar la  infecci&oacute;n chag&aacute;sica en forma precoz en reci&eacute;n nacidos de mujeres embarazadas  seropositivas. </font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">La descentralizaci&oacute;n del diagn&oacute;stico  en las &aacute;reas de alta endemia, adem&aacute;s de contribuir al control de la enfermedad  de Chagas cong&eacute;nita, establecer&iacute;a sistemas regionales de diagn&oacute;stico y  tratamiento para Chagas dentro de los ya establecidos en la estructura de  servicios de salud del pa&iacute;s.</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">Los resultados de m&aacute;s de 15 a&ntilde;os de  estudio de nuestro grupo, indican que a pesar de la alta sensibilidad de la  t&eacute;cnica PCR, resulta muy complejo su empleo con fines de diagn&oacute;stico a nivel  rural y en gran escala, siendo muy &uacute;til para evaluar el tratamiento realizado en  los ni&ntilde;os infectados (que es lo que realizamos de rutina hasta la fecha) (13,14).  Los  tests convencionales para la detecci&oacute;n de par&aacute;sitos en sangre son muy dif&iacute;ciles  de implementarlos rutinariamente a gran escala (a nivel de salud p&uacute;blica), la  serolog&iacute;a IgG convencional permite la detecci&oacute;n inequ&iacute;voca de infantes  infectados cong&eacute;nitamente despu&eacute;s de los 8 meses de edad (tiempo m&aacute;ximo  observado para el <i>clearence</i> de  anticuerpos maternos). Sin embargo, el tiempo requerido en el seguimiento para  descartar transmisi&oacute;n cong&eacute;nita disminuye la adherencia durante el periodo de  seguimiento con una importante p&eacute;rdida de ni&ntilde;os que no son tra&iacute;dos al control.  La detecci&oacute;n de casos de transmisi&oacute;n cong&eacute;nita aumenta notablemente cuando se  utiliza una combinaci&oacute;n de las t&eacute;cnicas serol&oacute;gicas convencionales y el  ant&iacute;geno recombinante de fase aguda SAPA en una sola muestra del infante entre 3 a 8 meses de edad. Demostramos, que al nacer la IgG anti-SAPA debe ser tomada  con mucho cuidado, debido a que a pesar de ser un marcador de fase aguda, el  40% de las madres poseen niveles detectables de IgG anti-SAPA en las zonas  estudiadas. Esto resulta un inconveniente para el diagn&oacute;stico en reci&eacute;n  nacidos, y no ha sido publicado anteriormente por otros grupos. </font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">Hemos establecido un modelo  sustentable localmente de diagn&oacute;stico prenatal para la enfermedad de Chagas,  para la interrupci&oacute;n de la transmisi&oacute;n cong&eacute;nita en zonas de alta endemia, como  tambi&eacute;n se ha logrado:</font></p> <ul> <font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">    <li>Determinar las regiones de mayor  seroprevalencia a la infecci&oacute;n por <i>T. cruzi</i> con el fin de tomar decisiones pol&iacute;ticas dirigidas hacia el control vectorial y  bancos de sangre. Este trabajo influy&oacute; en la decisi&oacute;n pol&iacute;tica de los a&ntilde;os 1999  y 2000 para fumigar, acciones de control vectorial, en ambos departamentos en  forma integral con el apoyo de las Gobernaciones y los municipios.</li></font> <font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">    ]]></body>
<body><![CDATA[<li> El sistema permite educar a la  familia sobre esta enfermedad a trav&eacute;s de los conocimientos adquiridos por la  madre.</li></font> <font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">    <li> Las mujeres seropositivas son  excluidas como posibles donantes de sangre.</li></font> <font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">    <li> Alertamos a aquellas mujeres  seropositivas sobre las posibles consecuencias cl&iacute;nicas de esta enfermedad,  haci&eacute;ndoles saber sobre la importancia de un chequeo cardiol&oacute;gico anual, que le  permitir&iacute;a detectar en forma temprana los efectos secundarios de la cardiopat&iacute;a  chag&aacute;sica y que eventualmente prolongar&iacute;a y mejorar&iacute;a su calidad de vida.</li></font> <font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">    <li>Desde el a&ntilde;o 1997 el programa prenatal  est&aacute; siendo localmente sustentable t&eacute;cnica y econ&oacute;micamente. El Ministro de  Salud P&uacute;blica y las Regiones Sanitarias han decretado de importancia en Salud  P&uacute;blica al programa prenatal y el programa de Chagas del SENEPA (Servicio  Nacional de Control de Vectores) se encarga de la compra y suministro de los  kits de ELISA para las Regiones Sanitarias, Paraguar&iacute; y Cordillera. El  laboratorio de Biolog&iacute;a Molecular del IICS-UNA, realiza los monitoreos  mensuales, evaluaciones de proceso y seguimiento como un componente de  Extensi&oacute;n Universitaria.</li></font>    </ul>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><b>AGRADECIMIENTO</b></font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">  Este trabajo ha  sido posible gracias al apoyo t&eacute;cnico log&iacute;stico de los docentes investigadores  del IICS y de las Regiones Sanitarias del MSPyBS:</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">Zunilda S&aacute;nchez<sup>1</sup>,  Graciela Meza<sup>1</sup>, Mar&iacute;a Almir&oacute;n<sup>1</sup>, Norma Candia<sup>1</sup>,  Leticia Franco<sup>1</sup>, Ivalena de Guill&eacute;n<sup>2</sup>, Mar&iacute;a Mercedes  Carpinelli de Tomassone<sup>3</sup>. </font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><sup>1</sup>Dpto.  de Biolog&iacute;a Molecular y Gen&eacute;tica, <sup>2</sup>Dpto.  Bioqu&iacute;mica y Producci&oacute;n, <sup>3</sup>Dpto. de Inmunolog&iacute;a. Instituto de  Investigaciones en Ciencias de la   Salud (IICS), UNA.</font></p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">Ministerio de Salud  P&uacute;blica: III Regi&oacute;n Sanitaria- Cordillera, IX Regi&oacute;n Sanitaria- Paraguar&iacute;.  Hospitales, Centros y Puestos de Salud.</font></p>     ]]></body>
<body><![CDATA[<p>&nbsp;</p>     <p><font size="3" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><b>BIBLIOGRAFIA</b></font></p>     <!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">1. Carlier Y, Torrico F. Congenital infection with <i>Trypanosoma cruzi</i>: from mechanisms of transmission to strategies for diagnosis and control.  Conclusions of round tables and synopsis of an international colloquium.  Cochabamba, Bolivia, 6-8 November 2002. Rev Soc Bras Med Trop (accessed 12/3/2007). 2003;(6):767-71.  Available from: <a href="http://www.scielo.br/pdf/rsbmt//v36n6/a24v36n6.pdf.">http://www.scielo.br/pdf/rsbmt//v36n6/a24v36n6.pdf.</a></font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=043888&pid=S1812-9528200900020000900001&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">2. Pan-American Health Organization.  PAHO/HDM/CD/476/07. Report of the technical consultation on information,  education and communication (IEC) on congenital Chagas’ disease 2007. (online).   PAHO (Accessed  12/3/2007). Available from: <a href="http://www.paho.org/English/AD/DPC/CD/dch-congenita-iec-07.doc.">http://www.paho.org/English/AD/DPC/CD/dch-congenita-iec-07.doc.</a></font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=043889&pid=S1812-9528200900020000900002&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">3. Organizaci&oacute;n Panamericana de la Salud. Estimaci&oacute;n  cuantitativa de la enfermedad de Chagas en las Am&eacute;ricas. Montevideo, Uruguay: OMS; 2006.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=043890&pid=S1812-9528200900020000900003&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">4. Freilij H, Altcheh J. Congenital Chagas´disease:  diagnostic and clinical aspects. Clin Infectious Disease 1995;21:551-5. </font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=043891&pid=S1812-9528200900020000900004&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">5. Russomando G. Assessment of a locally sustainable  system for Chagas’ disease diagnosis in two endemic regions of Paraguay.  TDR (online) 1999. (Accessed  29/6/2009). Available from: <a href="http://www.who.int/tdrold/research/finalreps/pdf/fr16.pdf.">http://www.who.int/tdrold/research/finalreps/pdf/fr16.pdf.</a></font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=043892&pid=S1812-9528200900020000900005&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">6.  Russomando G, Almiron M, Candia N, Franco L, S&aacute;nchez Z, de Guillen I. Implementaci&oacute;n y evaluaci&oacute;n de un sistema localmente  sustentable de diagn&oacute;stico prenatal que permite detectar casos de transmisi&oacute;n  cong&eacute;nita de la enfermedad de Chagas en zonas end&eacute;micas del Paraguay. Rev Soc Bras Med Trop 2005;38(2):49-54. </font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=043893&pid=S1812-9528200900020000900006&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">7.  Russomando G, Figueredo A, Almir&oacute;n M, Sakamoto M, Morita K. Polymerase Chain  Reaction-Based Detection of <i>Trypanosoma  cruzi</i> DNA in serum. J Clin Microbiol 1992;30:2864-8.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=043894&pid=S1812-9528200900020000900007&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">8.  Affranchino JL, Ib&aacute;&ntilde;ez CF, Luquetti AO, Rassi A, Reyes MB, Macina RA, et al. Identification of a <i>Trypanosoma cruzi</i> antigen that is shed during the acute phase of  Chagas' disease. Mol Biochem Parasitol 1989;34:221-8.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=043895&pid=S1812-9528200900020000900008&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">9. Frasch AC, Reyes MB. Diagnosis of Chagas’ disease using recombinant DNA technology. Parasitol Today 1990;6:137-9.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=043896&pid=S1812-9528200900020000900009&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">10. Reyes  MB, Lorca M, Munoz P, Frasch AC. Fetal  IgG specificities against <i>Trypanosoma  cruzi</i> antigens in infected newborns. Proc Natl Acad Sci USA 1990;87:2846-50.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=043897&pid=S1812-9528200900020000900010&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">11. Lorca M, Veloso C, Munoz P, Bahamonde MI, Garcia  A. Diagnostic value of detecting specific IgA and IgM with recombinant trypanosoma  cruzi antigens in congenital Chagas' disease. Am J Trop Med Hyg 1995;52:512-5.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=043898&pid=S1812-9528200900020000900011&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">12. Otani  MM, Vinelli E, Kirchhoff LV, del Pozo A, Sands A, Vercauteren G, et al. WHO comparative evaluation of serologic assays for  Chagas disease. Transfusion 2009;49(6):1076-82.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=043899&pid=S1812-9528200900020000900012&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">13. Russomando G, de Tomassone MMC,  de Guillen I, Acosta N, Vera N, Almir&oacute;n M, et al. Treatment of congenital Chagas´disease diagnosed and  followed up by the polymerase chain reaction. Am J Trop Med Hyg 1998; 59:487-91.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=043900&pid=S1812-9528200900020000900013&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif">14.  Schijman AG, Altcheh J, Burgos JM, Biancardi M, Bisio M, Levin MJ, et al.  Etiological treatment of congenital Chagas' disease diagnosed and monitored by  the polymerase chain reaction. J Antimicrob Chemother 2003; 52:441-9.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=043901&pid=S1812-9528200900020000900014&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><p>&nbsp; </p>     <p><font size="2" face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif"><i><a name="corres"></a><a href="#autor">*</a>Autor Correspondiente:<b>Dra. Graciela Russomando</b>, Departamento de Biología Molecular y Genética  Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Río de la Plata y Lagerenza. Asunción-Paraguay    <br> <i>Email:<a href="mailto:biomol@iics.una.py">biomol@iics.una.py</a></i></font></p>      ]]></body><back>
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