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1. INTRODUCCIÓN
El conocimiento etnofarmacobotánico se trasmite oralmente de una generación a otra, la investigación científica puede contribuir eficazmente a preservar este patrimonio cultural1. El uso de plantas medicinales, se ha ido acrecentando como resultado de la mezcla entre la cultura indígena y la de los conquistadores españoles2.
Una de las formas de consumo de las plantas medicinales, en Paraguay, además del tereré es el mate1,3,4,5. Las especies vegetales se pueden emplear para tratar diversas afecciones6. Las hojas y las partes aéreas, en general, constituyen las partes de la planta preferentemente empleadas7.
Un problema que surge en el uso de las plantas medicinales es conocer con exactitud su identidad botánica.
En Paraguay son aún escasos los estudios anatómicos de plantas medicinales, que aporten datos para la correcta identificación de las mismas, sobre todo considerando el número elevado de especies empleadas con esa finalidad en Paraguay, según varios autores; por ejemplo, 260 especies medicinales fueron reportadas por Basualdo et al.2,6, y 280 especies fueron mencionadas en el informe de la JICA8. Los estudios anatómicos en plantas medicinales de Paraguay, publicados, se inician recién en la década de los 90, en el Departamento de Botánica de la Facultad de Ciencias Químicas, de la Universidad Nacional de Asunción (FCQ-UNA), con el primer trabajo de Ortiz et al.9, que analizaron los tricomas glandulares de la hoja de Heliotropium procumbens Miller., al que le siguieron otros estudios en diferentes especies como: “cangorosa”, Maytenus ilicifolia Mart. ex Reissek10; “kapi’i katĩ”, Kyllinga odorata Vahl11,12; “salvia”, Lippia alba (Miller) N.E. Brown13; “jagua rová”, Jatropha isabelliae Müll. Arg.(14; “yerba mate”, Ilex paraguariensis A. St-Hil. var. paraguariensis15; Acanthospermum australe (Loefl.) Kuntze y A. hispidum DC.16; “burrito”, Aloysia polystachya (Griseb.)17; “taropé”, Dorstenia brasiliensis Lam18,19; y la primera Tesis Doctoral en Paraguay sobre anatomía vegetal que incluía el estudio de la morfoanatomía foliar de diez especies vegetales20. Pero aún queda mucho por investigar en el campo de la anatomía vegetal en Paraguay.
El “typycha hũ”, Sida rhombifolia L. (Malvaceae) es un subarbusto de hasta 80 cm de altura. Raíz profunda, leñosa y resistente. Presenta dos pequeños aguijones en forma de gancho debajo de las estípulas, éstas últimas son aleznadas, filiformes de 5-8 mm de longitud. Las hojas son simples, alternas, pecioladas, las láminas tienen forma rombo-lanceolada, con el ápice agudo, la base cuneada, de margen dentado en la mitad. Las flores son amarillas, con o sin mancha basal; con cáliz piramidal-campanulado; se disponen solitarias, en las axilas de las hojas, con pedicelos de igual largor o mayor que las hojas correspondientes articulados hacia el ápice. Los frutos son mericarpios trígonos-aplanados reticulados en la mitad basal, de 3 mm de longitud. Florece desde primavera hasta el otoño, crece en campo abierto y espartillares21.
Se lo utiliza como estomático22,23, antiséptico, diurético, para los riñones, dolor de muelas y heridas22.
Nombres comunes: typycha hũ, malva hũ, escoba dura, malva-preta. Es una especie nativa, anual o perenne. Maleza de campos de cultivos mecanizados como sorgales, maizales y sojales, así como de cultivos tradicionales y suelos modificados en general; crece sobre suelos arcillosos rojos o negruzcos, con una capa de arena encima, o suelos muy sueltos, arenosos, de grano grueso, blancos, a veces ralos o con hojarasca, secos.
Distribución en Paraguay: Alto Paraguay, Amambay, Boquerón, Caaguazú, Central, Cordillera, Guairá, Itapúa, Ñeembucú, Paraguarí, Presidente Hayes, San Pedro24.
Sinónimos en Flora del Cono Sur: Sida rhombifolia L. var. canariensis, Sida rhomboidea Roxb., Sida rhombifolia L. var. rhomboidea, Sida subrhombiformis Larrañaga25.
Sinónimos en Tropicos: Malva rhombifolia (L.) E.H.L. Krause, Napaea rhombifolia (L.) Moench, Sida adusta Marais, Sida alba Cav., Sida andicola Gand., Sida angustifolia Mill., Sida compressa Wall., Sida hondensis Kunth, Sida insularis Hatus., Sida pringlei Gand., Sida retusa L., Sida rhombifolia subsp. insularis (Hatus.) Hatus., Sida rhombifolia var. canariensis Griseb., Sida rhombifolia var. canescens DC., Sida rhombifolia var. guazumifolia K. Schum., Sida rhombifolia var. obovata Wall. ex Mast., Sida rhombifolia var. retusa (L.) Mast., Sida rhombifolia var. retusa Borss., Sida rhombifolia var. rhomboidea (Roxb.) Mast., Sida rhombifolia var. surinamensis K. Schum., Sida rhomboidea Roxb., Sida ruderata Macfad., Sida unicornis Marais 26.
Dentro de este contexto, se realizó el presente trabajo, cuyo objetivo fue el de establecer datos en relación a aspectos morfoanatómicos de S. rhombifolia, para la correcta identificación y el control de calidad de esta droga vegetal.
2. MATERIALES Y MÉTODO
2.2. Material de estudio y testigo
Las muestras fueron recolectadas de ejemplares cultivados en el Jardín de Aclimatación de la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Nacional de Asunción (FCQ-UNA). El material fue herborizado y depositado en el herbario con los siguientes datos:
S. rhombifolia L. (Malvaceae), typycha hũ, Paraguay, Dpto. Central, Campus Universitario San Lorenzo, Jardín de Aclimatación - Facultad de Ciencias Químicas, 04/VI/2018, M. González & G. González 43 (FCQ) (Figura 1).
2.3. Determinación del material y caracteres morfológicos
Se identificó taxonómicamente utilizando claves y descripciones proporcionadas por la bibliografía27 y comparando con material de herbario. Para la descripción de los caracteres morfológicos se utilizó la observación directa con ayuda de un microscopio estereoscópico Olympus BHK y un microscopio digital USB. Las medidas de las hojas fueron tomadas con una regla milimetrada y expresadas en centímetros (cm). La nomenclatura fue verificada con las bases de datos del Missouri Botanical Garden, Trópicos26 y del Instituto de Botánica Darwinion, Flora del Conosur25.
2.4. Caracteres anatómicos
Las muestras se fijaron en FAA (alcohol etílico 96°, agua destilada, formol y ácido acético glacial, 50:35:10:5) (D’Ambrogio de Argüeso, 1986)28.
Para todos los estudios anatómicos las muestras fueron de la parte media de la lámina y del pecíolo.
Las muestras fueron procesadas con microscopios de luz en el Departamento de Botánica, Dirección de Investigaciones de la FCQ-UNA y haciendo uso del Servicio de Microscopía electrónica de barrido de la Universidad Nacional del Nordeste, Corrientes, Argentina.
Para el estudio de la estructura por microscopía óptica (MO), se realizaron cortes transversales a mano alzada, de la lámina y del pecíolo. Con las muestras de las hojas se realizó el levantamiento de la epidermis, mediante el rasgado “peeling”. Las muestras obtenidas se clarificaron con hipoclorito de sodio al 50% según la Técnica de D’Ambrogio de Argüeso (1986)28, posteriormente dichas muestras se montaron en una mezcla de gelatina - glicerina con safranina.
Para la observación en el Microscopio electrónico de barrido (MEB), se utilizaron muestras de la superficie foliar, cortes transversales de la lámina y del pecíolo, que fueron deshidratadas en alcohol 70° y en una serie ascendente de acetona 70°, 80° y 100°, según la Técnica de Johansen DA. (1940)29, se realizó el Secado a Punto Crítico, luego se realizó el Metalizado con una fina capa de oro, para finalmente poder observar en el MEB.
Para el análisis, descripción y toma de fotografías de los caracteres morfológicos y anatómicos se empleó una cámara digital AmScope ToupView (2011), incorporada al Microscopio Óptico marca OLYMPUS serie BH2, editadas con el software Micam (2012) y el MEB.
2.5. Índice Estomático (IE)
Para la determinación del índice de estomas, se realizó 20 determinaciones en la parte media de la hoja y se calculó la media aritmética, se enfocó con un objetivo de 40X, la epidermis inferior y superior que contiene a los estomas, y se procedió al conteo, el cálculo se realizó utilizando la siguiente fórmula:
IE=[(n° estomas / n° células epidérmicas + n° estomas) x 100]
3. RESULTADOS
A continuación, se presentan los resultados de las observaciones morfológicas (Figura 2. A-C) y anatómicas de la especie en estudio.
3.1. Caracteres morfológicos
Hojas discoloras, de forma romboide-lanceolada, margen basal entero y a partir dela mitad o en los 2/3 superiores dentado, ápice agudo-obtuso y base truncada; de (2,10)-3,29-(4,30) cm de longitud, (0,50)-0,82-(1,00) cm de latitud superior, (0,70)-1,46-(1,90) cm de latitud media, (0,40)-0,82-(1,80) cm de latitud inferior; con pecíolos de (0,30)-0,38-(0,40) cm. Lamina simétrica, venación pinnada-eucamptodroma.
3.2. Caracteres anatómicos
A - Lámina foliar (Figura 3. A-F)
En vista superficial: las células epidérmicas son poligonales con paredes anticlinales onduladas. Hoja anfiestomática, con estomas de tipo anisocítico en ambas epidermis (Figura 3. B) y de tipo anomocítico en la epidermis abaxial. En la epidermis adaxial, con IE medio de 7,49 con valores oscilando entre 4,62 y 10,39 y en la epidermis abaxial el IE medio fue de 15,00 con valores oscilando entre 12,50 y 20,00. En ambas epidermis se observan cuatro tipos de pelos: pelo estrellado unicelular (Figura 3. C); y pelo glandular con pie y cabeza globosa unicelular (Figura 3. D), pelo glandular globoso pluricelular biseriado, sésil (Figura 3. E), y pelo glandular pluricelular de base globosa y alargada en el ápice (Figura 3. F).
Figura 3. A-F. Vista superficial de epidermis. A. Epidermis abaxial, con pelo estrellado (PE) y pelo glandular (PG) de pie y cabeza unicelular. B. Estoma anisocítico, en epidermis adaxial. C. Pelo estrellado, en epidermis adaxial. D. Pelo glandular, de pie y cabeza globosa unicelular, en epidermis abaxial. E. Pelo glandular globoso pluricelular biseriado, sésil, en epidermis abaxial. F. Pelo glandular pluricelular de base globosa y alargado en el ápice, en epidermis abaxial. (Ref: A=MEB. B-F=MO).
Sección transversal (Figura 4. A y B): ambas epidermis unistratas, con células de forma cuadrangular, rectangular y globosa, siendo de mayor tamaño las de la epidermis adaxial; con cuatro tipos de pelos ya mencionados en la vista en superficie; estomas ubicados a nivel de las células epidérmicas, el mesófilo es dorsiventral, formado por uno a dos estratos de parénquima en empalizada hacia la cara adaxial y de tres a cuatro estratos de parénquima esponjoso hacia la cara abaxial, presencia de células idioblásticas con cristales de oxalato de calcio en forma de drusas.
Vena media (Figura 4. C): en transcorte es biconvexa, siendo la convexidad mayor hacia la cara abaxial, las características del tejido epidérmico son iguales al resto de la lámina, por debajo de las epidermis se observa de uno a dos estratos de colénquima de tipo angular, hay un único haz vascular de tipo colateral abierto rodeado por la vaina parenquimática, presencia de cristales de oxalato de calcio en forma de drusas en las células parenquimáticas y en el floema.
Figura 4 A. Corte transversales de la lámina (MO). B. Corte transversal de la lámina (MEB). C. Vena media, corte transversal (MO). Ref.: CP: células parenquimáticas, C: colénquima, Cu: cutícula, D: drusas, EpS: epidermis superior, EpI: epidermis inferior, PEm: parénquima en empalizada, PEs: parénquima esponjoso.
B - Pecíolo
Sección transversal: es de contorno semicircular (Figura 5. A). La epidermis unistrata, presenta cuatro tipos de pelos, los mismos que fueron descriptos en la lámina; el colénquima es de tipo angular continuo, de dos a tres estratos (Figura 5. B); células parenquimáticas; células idioblásticas conteniendo cristales de oxalato de calcio en forma de drusas; en el centro cuatro haces vasculares centrales de tipo colateral abierto, dispuestos en forma no continua (Figura 5. C).
Figura 5 A-C. Pecíolo, corte transversal. A. Detalle de la forma semicircular. B. Colénquima de tipo angular, en detalle. C. Vista detallada del haz vascular. Ref.: C: colénquima, CP: células parenquimáticas, D: drusas, Ep: epidermis, F: floema, HV: haz vascular, PE: base del pelo estrellado, PG: pelo glandular, X: xilema.
4. DISCUSIÓN
Para la familia Malvaceae, Metcalfe y Chalk30, reportaron pelos estrellados, pelos glandulares pequeños y otros con forma de matraz, estomas de tipo anomocítico en ambas superficies, hoja dorsiventral en la mayoría de los casos, cristales de oxalato de calcio en forma de drusas. Todos estos caracteres se corresponden con lo observado para la especie estudiada en este trabajo. Los mismos autores reportaron también que el pecíolo suele contener de seis o más haces colaterales aislados dispuestos en un círculo, sin embargo, en este trabajo se ha observado solo cuatro haces. Por su parte, Albert y Victoria, observaron para esta especie, en ambas superficies estomas de tipo anomocítico, pelos estrellados y glandulares31, resultados coincidentes con este trabajo. Colares y Ochoa reportaron hoja anfiestomática con estomas de tipo anisocítico y anomocítico, pelos glandulares y eglandulares, mesófilo dorsiventral, con drusas32, también en coincidencia con los resultados de este trabajo.
