INTRODUCCIÓN
La sangre tiene un rol fundamental en el transporte de gases, nutrientes y productos del desecho metabólico del cuerpo 1. La determinación de los componentes sanguíneos mediante pruebas de laboratorio, representan herramientas importantes para orientar al diagnóstico de diversas enfermedades 2. En este sentido, los perfiles bioquímicos constituyen una fuente de información trascendental para evaluar el estado de salud de las aves, reflejando además muchas alteraciones de órganos y tejidos 3). Las determinaciones sanguíneas se encuentran influenciadas por diversos factores como la edad, raza, línea genética, manejo, estado fisiológico, respuesta individual y condiciones medioambientales 4.
En los últimos años se han incrementado los estudios de perfiles bioquímicos en, en líneas parrilleras y gallinas nativas bajo diferentes sistemas de explotación 5,6,7, comparando aves criollas con líneas parrilleras y aves indígenas con diferentes líneas y razas 8,9. Además, de la determinación de variables séricas bajo ciertas condiciones ambientales 2,10,11 y en aves de postura con suplementación alimenticia 12,13,14.
En el Paraguay, existe una población local denominada Rustipollos, con características particulares en comparación a otras poblaciones avícolas, como ser bajas tasas de mortalidad, animales de doble propósito (carne y huevos), de gran tamaño corporal y lo más resaltante, su desempeño en condiciones ambientales desfavorables, como el clima del país, con un norte cálido y tropical a un sur subtropical, enmarcado en una zona de alta humedad todo el año.
Considerando lo expuesto y al no existir investigaciones similares en dicha población, el objetivo de este trabajo fue establecer los intervalos de referencia para los valores sanguíneos de proteína total, albúmina, globulina, ácido úrico, colesterol, aspartato aminotransferasa, calcio y fosfato inorgánico en Rustipollos criados en el área de San Lorenzo, Paraguay..
MATERIALES Y MÉTODOS
Localización.
El trabajo se llevó a cabo en la División de Avicultura, de la Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de Asunción, San Lorenzo, Paraguay. Localizada en las coordenadas geográficas 25° 19' 65'' Latitud Sur y 57° 31' 16'' Longitud Oeste. El clima es tropical a subtropical, con una temperatura media de 23,7°C y humedad relativa de 75,1%. El promedio registrado de las precipitaciones es de 2.137 mm 15.
Animales.
Se utilizaron 52 Rustipollos (45 hembras y 7 machos), adultos de entre 2 a 3 años de edad. Alojados en galpón a piso sobre cama de cáscara de arroz, abierto a ambos costados, protegido con malla de alambre y cortinas de plástico. Las aves fueron alimentadas ad libitum con balanceado comercial de postura en comederos tipo tolva y con disponibilidad de agua en bebederos tipo campana.
Recolección de muestras y análisis de perfil bioquímico.
Las muestras de sangre se obtuvieron de la vena braquial de cada uno de los individuos. Se extrajo 1 mL. de sangre venosa que fue depositada en tubo sin anticoagulante, para la obtención posterior del suero sanguíneo. Se almacenaron en microtubos de 1,5 mL a -20°C para su posterior análisis laboratorial.
Los análisis bioquímicos se realizaron en el Laboratorio de Patología Clínica, Departamento de Patología y Clínica, Facultad de Ciencias Veterinarias, UNA. Las variables determinadas fueron proteína total, albúmina, ácido úrico, colesterol, aspartato aminotransferasa, calcio y fosfato inorgánico con el analizador semiautomático (BTS-370, Biosystems, Barcelona, España) previamente calibrado con un suero control (HumaTrol N, Wiesbaden, Germany). La concentración de globulinas se obtuvo por diferencia entre las concentraciones de proteína total y la albúmina. En la Tabla 1 se describen los analitos bioquímicos, unidades de medida y el método de análisis para cada parámetro.
Análisis estadístico
Los intervalos de referencia se establecieron en base a las normas de la American Society of Veterinary Clinical Pathology, ASVCP 16. Inicialmente, se determinó la normalidad de los datos con la prueba de Kolmogorov-Smirnov, siendo los no normales normalizados por el método de logaritmos. Posteriormente, se evaluó la distribución de los datos y se identificaron los posibles valores atípicos (outliers) para cada parámetro mediante histogramas.
Considerando el tamaño muestral (n=52), se utilizó el método robusto para cálculo de valores referenciales según lo indicado por las normas de elaboración de valores referenciales, método que usa interacciones sucesivas hasta encontrar el centro y la dispersión de los datos pudiendo ser usado en ausencia de normalidad 16.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En la Tabla 2, se presentan los resultados de la estadística descriptiva para las diferentes variables estudiadas con sus respectivos intervalos de referencia con un nivel de confianza del 95%. Los valores medios de PROT-T, ALB y GLO fueron ligeramente superiores con relación al rango de referencia utilizado en el laboratorio. En tanto, que el Ca y la AST, presentaron concentraciones altamente superiores. Los niveles de URIC, COL y Pi se encontraron dentro de la normalidad 17.
N: Cantidad de muestras; DE: Desvio Estándar; IR: Intervalo de referencia; LIR: Límite Inferior de Referencia; LSR: Límite Superior de Referencia.
La gran mayoría de las proteínas circulantes en el plasma son sintetizadas por el hígado, a excepción de las inmunoglobulinas 18. Las principales proteínas plasmáticas son las albúminas, globulinas y el fibrinógeno. Están envueltas en múltiples funciones, tales como el mantenimiento de la presión osmótica, viscosidad de la sangre, transporte de nutrientes, metabolitos, hormonas, productos de excreción, regulación del pH sanguíneo y participación en la coagulación sanguínea 19.
En un estudio 20, comparando perfiles bioquímicos de gallinas indígenas de la India y pollos parrilleros, encontraron diferencias significativas en los valores de PROT-T, ALB y GLO. En el grupo de gallinas indígenas los valores medios de PROT-T, ALB y GLO fueron superiores con relación a la línea parrillera indicando que el incremento en las concentraciones de PROT-T podría deberse a la presencia de estrógenos, teniendo en cuenta que las aves fueron muestreadas en etapas cercanas a la madurez sexual. Los autores destacan además, que el aumento en la concentración de GLO podría relacionarse con una mayor resistencia a las enfermedades. Por otra parte, en otro estudio 9 caracterizaron el perfil hematológico y bioquímico de aves de chacra o criollas del Perú en relación a una línea genética, hallaron el mayor valor de PROT-T en las gallinas criollas de crianza extensiva con relación a pollos parrilleros, relacionada probablemente con el alto desafío que reciben las primeras en su medio ambiente natural, representando un mecanismo junto con el de la selección genética natural, para fortalecer al sistema de defensa de tal manera que estas son más resistentes a las infecciones que los pollos mejorados 21. Además, analizando valores hematológicos, bioquímicos y electrocardiograma en gallinas nativas de Kashmir 6, se encontraron incrementos en la concentración de PROT-T, ALB y GLO en relación al sexo, siendo mayores en hembras que en machos. Las diferencias observadas podrían atribuirse a la mayor cantidad de hembras muestreadas y a la influencia del estrógeno, como se había mencionado anteriormente.
Los resultados reportados en las investigaciones descritas, son similares a los hallados en la población Rustipollos, pudiendo estar relacionado con el mayor número de hembras muestreadas y que las mismas, se encontraban en edad reproductiva. Destacando que estos animales son considerados resistentes a enfermedades infecciosas, por no recibir ningún plan de vacunación y presentar bajas tasas de mortalidad, pudiendo reflejarse esto en la concentración de globulina reportada.
El ácido úrico es el principal producto de desecho nitrogenado de las aves 22. Es sintetizado predominantemente en el hígado y una pequeña parte en los túbulos renales. Aproximadamente el 80 a 90% es secretado en forma activa en los túbulos contorneados proximales normalmente en las aves 23. Sus concentraciones aumentan cuando hay daño a nivel renal, reduciendo su eliminación 4.
En un estudio del efecto de tres sistemas de crianza sobre los parámetros sanguíneos y respuesta inmunológica en cuatro variedades de gallinas indígenas de Assel 7. Se observó un valor superior del URIC en una variedad de gallinas indígenas, manifestando que dicha diferencia podría ser atribuible al factor genético. En tanto, determinaron los niveles de los componentes séricos en pollos parrilleros de tres diferentes edades. Encontrando que los valores de URIC fueron más altos en aves jóvenes de 21 días de edad, con relación a aves de 35 y 42 días 24. Estos resultados, concuerdan con el valor de proteína suministrado en la fase inicial de la producción. En ese sentido, en una investigación en pavos 25 se encontró una relación directa entre la cantidad de proteína ingerida y la concentración sérica de URIC. Las diferencias encontradas en el valor de URIC con relación a este trabajo, podría estar asociada al grupo genético, tipo de alimentación y estado de hidratación de las aves 26.
El colesterol se encuentra en todos los tejidos animales, siendo el componente principal de todas las membranas, además es precursor de hormonas esteroideas, la vitamina D y ácidos biliares 27. El metabolismo del colesterol en las aves es comparable con los mamíferos. Sin embargo, elevaciones de este componente no siempre estarán relacionadas con condiciones patológicas 18.
En ese sentido, se reportaron diferencias en las concentraciones de COL en gallinas indígenas con relación a pollos parrilleros 20. Siendo reportados en una investigación 2 valores elevados en las medias de la concentración sanguínea de triglicéridos y colesterol en aves jóvenes. Los pollos de engorde de 21 días tenían mayores concentraciones de COL debido a la demanda de energía causada por un mayor desarrollo corporal a esta edad. Resultados similares fueron encontrados en pollos parrilleros 24 con variaciones en la concentración de COL en función a la edad, siendo los valores más altos en pollos de 21 días. Esto se explica por la baja movilización de estos constituyentes por los tejidos y aumento de la síntesis hepática 26.
La concentración de COL en los Rustipollos, se encontró dentro del rango de referencia 17, pero fue inferior a hallados en los trabajos anteriormente mencionados, estando influenciado quizás por la edad de las aves.
La AST tiene amplia distribución en los tejidos de las aves, presentando elevada actividad en varios órganos y tejidos, principalmente en el corazón, hígado, musculatura esquelética, riñón y cerebro 4. Actualmente se considera que la actividad sérica de la AST es un indicador muy sensible pero no específico de enfermedad hepatocelular en otras aves, y se usa con la creatinquinasa (CK) enzima específica del músculo para diferenciar entre el daño hepático y muscular 22.
Valores inferiores de AST, con relación a este trabajo, fueron reportados en gallinas ponedoras de la línea Dekalb influenciado por condiciones climáticas 4 y ponedoras de la línea Hisex brown en fase de pre-pico y en pico de producción 28. Las diferencias encontradas se relacionan de manera directa con la alimentación, teniendo en consideración que durante el pico de postura la producción de huevos alcanza porcentajes superiores al 90%, siendo probablemente el período en que la demanda de nutrientes se vuelve más elevada, principalmente el nivel de aminoácidos, para atender el máximo potencial de producción de las aves 29. Sin embargo, el incremento de la ración se realiza en el periodo pre-pico de producción para estimular a las aves. De esta manera, el tejido hepático es altamente exigido para metabolizar parte de los nutrientes provenientes de la dieta, ocasionando lisis de las células hepáticas y, consecuentemente, la extravasación de sus componentes intracelulares, aumentando la actividad sérica de AST. La mencionada enzima está presente muchos tejidos, siendo un indicativo de daños en tejidos blandos, especialmente tejidos cardíacos y hepáticos 30.
Valores superiores de AST fueron encontrados en pollos parrilleros de la línea Cobb con miopatía dorsal crónica 31. En otra investigación utilizando pollos de la línea HYBRO PG (24), se demostró que la actividad de AST se incrementaba con la edad. El autor menciona que este aumento, posiblemente se deba al intenso metabolismo hepático y al importante desarrollo muscular que generalmente ocurre durante este período. Destaca además, que el alimento suministrado a las aves no fue analizado en busca de micotoxinas, lo que también puede influir la actividad de AST y con frecuencia está presente en granjas avícolas.
En ese sentido, en una investigación en pollos de engorde se estudió la eficacia de la N-acetilcisteína para reducir los efectos de la intoxicación con aflatoxina B132, demostrando que la aflatoxina B1 incrementaba la actividad de la AST en un 65%. Similares resultados fueron descritos analizando variaciones de los parámetros bioquímicos clínicos de gallinas ponedoras y pollos de engorde, que recibieron alimentos que conteníanaflatoxina, variando la concentración según la cantidad de toxinas inoculadas en los alimentos 33.
La elevada actividad de AST encontrada en la población Rustipollos podría indicar daño hepatocelular, pero al ser poco específica y estar presente en varios órganos y tejidos, sería necesario estudiaren conjunto con la enzima CK, de manera a diferenciar entre daño hepático y muscular. Otra causa del incremento enzimático, podría ser la edad de las aves y la presencia de micotoxinas, teniendo como antecedentes los trabajos mencionados anteriormente.
Los electrolitos monovalentes como el sodio, potasio y cloro ejercen funciones muy específicas en el equilibrio ácido-base. Estos electrolitos acompañados de minerales en su forma iónica como el calcio, el magnesio, el fósforo y las proteínas plasmáticas desempeñan un papel importante en la síntesis proteica en los tejidos, en el mantenimiento de la homeostasis intra y extracelular, del potencial eléctrico de las membranas celulares, en la regulación de la presión osmótica, así como el funcionamiento del sistema nervioso 34.
En pollos de engorde bajo estrés calórico crónico determinaron los cambios en la bioquímica sanguínea y la concentración plasmática de corticosterona en pollos de engorde 11. Demostrando que los pollos criados en galpón con ambiente controlado y sometidos al efecto del estrés calórico crónico (30±1ºC) presentaron menores concentraciones de calcio que las aves criadas con la temperatura ambiental del piedemonte amazónico (29,87±7,51ºC). Las concentraciones inferiores de la calcemia y fosfatemia de los pollos de engorde en las condiciones de estrés calórico crónico posiblemente sean consecuencia de la disminución del consumo de alimento ocasionado por la condición ambiental y como respuesta del ajuste homeostático realizado por el organismo animal en las condiciones climáticas estresantes 35.
En una investigación en gallinas ponedoras en las últimas fases de producción de huevos analizaron los metabolitos bioquímicos, reportando que la concentración del calcio se incrementaba con la edad. En tanto, que la fosfatemia disminuía con el pasar del tiempo 36.
Resultados similares, fueron hallados en gallinas locales de diferentes edades y sexo, encontrando el mismo comportamiento con relación a la calcemia y fosfatemia 37; en ponedoras bajo diferentes sistemas de producción determinando concentraciones elevadas de calcio y disminuidas de fósforo en aves adultas (38) y en gallinas ponedoras suplementadas con Panax ginseng donde se reportó que a medida que aumentaba la edad, se incrementaban los niveles de calcio y fósforo 13.
El calcio es principalmente necesario para la osificación de los huesos, la regulación de la actividad muscular, catalización de las enzimas y el sistema hormonal. El aumento de las concentraciones de calcio con la edad puede deberse a la mayor secreción de hormonas esteroides. Las hormonas esteroides están implicadas en la regulación del metabolismo del calcio en las gallinas ponedoras a través de varios modos de acción 36.
Las concentraciones de calcio dependen del ciclo reproductivo, el sexo y posiblemente la temporada. Se deben establecer intervalos de referencia separados para cada una de estas variables para una evaluación clínica precisa de los valores de calcio. La absorción, excreción y la compartimentación afectan todos los aumentos y disminuciones en el calcio plasmático. Los estados de enfermedad que afectan el tracto reproductivo, renal y digestivo, así como los trastornos nutricionales severos pueden cambiar la concentración de calcio 22.
Los factores relacionados con el clima, el tipo de alimentación y el manejo pueden influir en los resultados, imposibilitando el uso de valores de referencia determinados en otros países. Por esta razón, es importante la determinación de parámetros bioquímicos para cada región 37.