INTRODUCCIÓN.
La campilobacteriosis (infección por Campylobacter) es la zoonosis de transmisión alimentaria más comúnmente reportada en la mayoría de los países desarrollados y en vías de desarrollo 1. La principal fuente de infección para los seres humanos es la manipulación y/o consumo de carne de pollo mal cocida 2. La tasa real de notificación de campilobacteriosis en Paraguay se desconoce debido al subregistro de los casos de diarreas que se dan debido a intoxicaciones alimentarias lo que subestima el verdadero impacto de la enfermedad, aunque existen estudios que reportan prevalencias que van del 13 al 20 % de casos de campilobacteriosis en el país, según estudios de patógenos en muestras diarreicas en el Paraguay 3,4,5. Las poblaciones más susceptibles en humanos constituyen los niños menores de 5 años, adolescentes, adultos jóvenes, ancianos o individuos inmunosuprimidos 6. La gran mayoría de las infecciones en humanos son causadas por Campylobacter jejuni, seguido de Campylobacter coli, siendo la mayoría de las infecciones esporádicas y autolimitantes 7. Los síntomas más frecuentemente citados son diarrea, dolor abdominal, escalofríos y fiebre. 8. Las complicaciones graves no son muy frecuentes pero pueden desarrollarse infecciones extra intestinales con bacteriemia, hemorragias intestinales, hepatitis,pancreatitis, megacolon tóxico,síndrome hemolítico urémico y en algunas ocasiones adenitis mesentérica 9,10. También se reportan algunas secuelas de la infección como la artritis reactiva y los síndromes de Guillain-Barré (SGB) y de Miller Fisher 11,12. Debido a su naturaleza autolimitante, los antimicrobianos solo se recomiendan para el tratamiento cuando hay una infección prolongada o sistémica.
Existen numerosas investigaciones sobre identificación, prevalencia y sensibilidad antimicrobianas de Campylobacter spp., en diferentes tipos de muestras de origen avícola que han sido realizadas en la región, los valores de prevalencia reportados fueron del 15 % en el Departamento Central en Paraguay 13, 34 % en Chile 14, 50 % en Argentina 15, por citar algunos.
Es importante mencionar que varios estudios han informado las tasas de resistencia a los antimicrobianos de Campylobacter spp. aislados en diferentes países y con frecuencia se encuentra una diversidad de tasas de resistencia entre países 16. Se ha reportado una resistencia generalizada de Campylobacter a las quinolonas en aislados de aves de corral 17,18,19,20. Además, se han reportado C. jejuni y C. coli resistentes a múltiples fármacos en aislados de animales de consumo, particularmente aves y cerdos 21,22,23,24.
En los últimos años la comunidad científica ha manifestado una gran preocupación por el alarmante incremento de la resistencia a antibióticos debido al problema que esto supone en el tratamiento de las enfermedades infecciosas, tanto en sanidad animal como en la salud pública, teniendo en cuenta el concepto una sola salud. Históricamente los antimicrobianos han sido utilizados en la ganadería tanto para el tratamiento de infecciones como para promover el crecimiento especialmente en aves y cerdos de engorde 6. Los antimicrobianos en la industria avícola se utilizan principalmente como tratamientos metafilácticos y terapéuticos. Por otro lado, la práctica de administrar promotores del crecimiento que contienen antimicrobianos está totalmente prohibida en toda la Unión Europea desde el año 2006, sin embargo, todavía se sigue utiliozando con este propósito en otros continentes 25. La prohibición del uso de antibióticos como promotores del crecimiento en algunos países, hizo que se buscaran nuevas alternativas al uso de los antibióticos en la alimentación animal, como el uso de probióticos (bacterias que compiten con los patógenos y mantienen el equilibrio de la flora intestinal), enzimas que mejoran la digestión de los alimentos o la adición de ciertos ácidos orgánicos, entre otras. En Paraguay, la red de vigilancia de la resistencia a antibióticos se encuentra trabajando de manera mancomunada con los distintos sectores de salud pública, sanidad animal y otros, ya que en animales tiene un papel importante el seguimiento de las tasas de resistencia que pudiesen indicar desvíos en los patrones de uso de los antibióticos. Dada la importancia de la campilobacteriosis, se debe de hacer hincapié en realizar una vigilancia activa de esta zoonosis a nivel nacional, intensificando los esfuerzos para determinar y comunicar todos los posibles casos de campilobacteriosis. Considerando la principal causa de campilobacteriosis humana es el consumo de carne de pollo poco cocida, es relevante la evaluación de la resistencia antimicrobiana de los aislados de Campylobacter spp. de aves de corral.
El objetivo de este estudio fue tipificar y evaluar la sensibilidad antimicrobiana las cepas de Campylobacter jejuni, Campylobacter coli aisladas de pollos parrilleros del Bajo Chaco de la República del Paraguay a lo largo de los ciclos de cría de 6 lotes en dos granjas de explotación intensiva.
MATERIALES Y MÉTODOS.
El estudio fue de tipo observacional, prospectivo, longitudinal, se trabajó en dos granjas de explotación intensiva de pollos, ubicados en el Bajo Chaco - Paraguay en los años 2018, 2019 y 2020, las granjas fueron identificadas como granja A y granja B. En cada granja se trabajó con 6 lotes, de cada lote se obtuvo de manera aleatoria 10 muestras de hisopado cloacal a los 15, 22, 29 y 36 días de edad de las aves (por lote) durante 4 semanas consecutivas. Se obtuvo un total de 480 hisopados cloacales, que fueron enviados al laboratorio en medio de transporte Cary Blair modificado de la marca Britania(r). Fueron cultivadas por el método de siembra por agotamiento en un medio selectivo para el aislamiento de Campylobacter spp., Skirrow modificado preparado con Agar base Brucella de la marca Britania(r) con agregado de suplementos y mezcla de antibióticos marca Britania(r), e incubados a 42o C, durante 48 horas, en condiciones de microaerofilia, generadas con el uso de sobres generadores de microaerofilia marca Oxoid(r).
Las colonias características fueron sometidas a una prueba fenotípica por medio de tinción de Gram, Hidrólisis de hipurato y tipificación por técnicas moleculares utilizando la Reacción en Cadena de la Polimerasa PCR de punto final para la confirmación del género bacteriano por amplificación del gen ADN ribosomal 16S, según Linton et al. 1996 26 e identificación de especie según Rosef et al 1983 27.Se determinó la susceptibilidad a tres antimicrobianos ciprofloxacina, eritromicina y tetraciclina, mediante la técnica de Difusión en agar utilizando tiras de E test según Clinical and Laboratory Standards Institute. Para la interpretación de los resultados se utilizaron los puntos de corte de Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI M045 para Campylobacter spp. 28.
RESULTADOS.
Se analizaron un total de 480 muestras provenientes de dos granjas del Bajo Chaco - Paraguay, fueron aisladas 54 cepas de Campylobacter spp. correspondiendo al 11.25% de total de muestras procesadas. (Figura 1).
La especie predominante fue Campylobacter jejuni 96% (52/54), pero también se identificó Campylobacter coli 4% (2/54) en menor proporción. (Gráfico 1)
En cuanto al análisis de la susceptibilidad antimicrobiana, cabe mencionar que en el presente estudio se evaluó la sensibilidad de las cepas de Campylobacter spp. provenientes de muestras de hisopado cloacal de pollos parrilleros frente a tres antimicrobianos (eritromicina, ciprofloxacina y tetraciclina), se observó una sensibilidad del 100 % a la eritromicina y también a la tetraciclina, por el contrario, se demuestra un 22 % de cepas resistentes a la ciprofloxacina. (Gráfico 2)
DISCUSIÓN.
En este estudio se obtuvo un porcentaje de aislamientos de Campylobacter spp. menor a las reportadas por otras investigaciones en la región. En Argentina en un trabajo similar la prevalencia total fue del 70 % 15, en Chile 34 % de casos positivos 14, mientras que los resultados obtenidos fueron similares a los publicados por Cardozo et al., 2017 13 en Paraguay, en cuya publicación se reporta una tasa del 15 % de asilamientos de Campylobacter spp. Este bajo porcentaje puede deberse a las buenas prácticas de manejo higiénicos y sanitarios de las dos granjas y también a la ubicación geográfica de ambas que facilita el cumplimiento de los protocolos de bioseguridad debido a que se encuentran en zonas bien alejadas de poblaciones humanas, de animales y sobre todo de otras especies de aves. La especie predominante fue Canpylobacter jejuni (96%) pero también se identificó Campylobacter coli (4%) en menor proporción, resultados similares a los encontrados por varios estudios realizados en la región y en otros países de Europa, donde se reportan aislamientos más frecuentes de Campylobacter jejuni en muestras provenientes de aves de corral y sus productos 6,14,15,29, sin embargo es importante mencionar que en estudios similares hechos en el país en los últimos años no se aislaron últimamente especies de Campylobacter coli5,13 por lo tanto, es valioso mencionar el hallazgo de esta especie en el presente estudio, ya que queda demostrado la presencia de C. coli en la aves de producción en el Paraguay, teniendo en cuenta que esta especie puede también ocasionar infecciones gastrointestinales en los humanos.
De las 54 cepas de Campylobacter spp. aisladas en el presente trabajo se observa una sensibilidad del 100 % a la eritromicina, resultados similares hallados en estudios realizados en el Paraguay 5,13 y en la región 14. Así mismo, del total de muestras analizadas todas fueron sensibles a la tetraciclina (100%), siguiendo la misma línea, en otros estudios han demostrado bajo porcentaje de cepas resistentes a tetraciclina 5 reportando un 91 % de cepas sensibles a este antimicrobiano de muestras provenientes de pollos y cerdos en el Paraguay y los citados por López et al., 2017 15 en un trabajo similar realizado en Argentina. Sin embargo, difiere de otros trabajos realizados donde obtuvieron porcentajes elevados de resistencia al mencionado antimicrobiano 6,30, quienes demuestran un 72.9 % y 94 % de cepas resistentes a la tetraciclina respectivamente. Por otro lado, en este estudio, se reporta una resistencia de 22 % frente a la ciprofloxacina, resultados relativamente menores a los descriptos por Cardinale et al., 2005 31, y significantemente inferiores a los publicados por 5,6,13,14,30, quienes mencionas en sus respectivas publicaciones porcentajes que van del 70 al 100 % de resistencia a la ciprofloxacina. En general las cepas de Campylobacter spp. identificadas en este estudio demostraron tasas de resistencia relativamente bajas comparando con otros estudios, esto puede deberse al sistema de manejo de las granjas muestreadas, ya que en las mismas se practican rotaciones en el uso de antimicrobianos para el tratamiento de las distintas infecciones de los pollos que pueden sufrir en los distintos lotes de producción y sólo en casos necesarios se instaura un tratamiento con antibióticos.
Por último, es importante recordar la importancia de fortalecer un sistema de vigilancia integral de resistencia antimicrobiana de cepas provenientes de animales de consumo, alimentos y la población humana, de manera tal a identificar oportunamente a bacterias resistentes a antibióticos que se utilizan para el tratamiento de infecciones en humanas por esta bacteria como es el caso de la eritromicina y la ciprofloxacina, así también frente a otros antibióticos que se utilizan en medicina veterinaria como la tetraciclina que pudieran llegar a ser un factor de riesgo para el hombre a través de la cadena alimentaria.
CONCLUSIÓN.
En el presente estudio se identificaron cepas de Campylobacter spp. en granjas de explotación intensiva de pollos en la Bajo Chaco - Paraguay, siendo más frecuente la especie Campylobacter jejuni (96%), pero también se identificó Campylobacter coli en menor proporción (4%), en cuanto a la evaluación de la sensibilidad antimicrobiana el 100 % de los aislamientos demostraron sensibilidad frente a eritromicina y tetraciclina y el 22% resistencia a la ciprofloxacina, confirmando la importancia de establecer programas de monitoreo y vigilancia epidemiológica en aves de consumo de manera a evaluar periódicamente las tendencias y establecer medidas para controlar la dinámica de comportamiento de la bacteria en la población aviar y contener la resistencia antimicrobiana.