INTRODUCCIÓN

La actividad avícola mundial ha experimentado respetable crecimiento en los últimos años, destacándose dentro de este rubro la producción de carne de pollo por haber desarrollado un alto nivel tecnológico cuando se compara con otras especies. Para que este sistema productivo sea eficiente tiene que ser capaz de reconocer, controlar y resolver rápidamente las enfermedades que puedan emerger ¹. Cuantificar los niveles de anticuerpos, o sea la cantidad de inmunoglobulinas producidas en respuesta a algún antígeno particular, es necesario para evaluar la eficacia de las vacunas y controlar las condiciones sanitarias del medio ambiente en ausencia y/o exposición de enfermedades ². Su utilización es importante ya que garantiza un programa sanitario ideal, incrementando la eficiencia de la granja reflejando ganancias económicas para el productor ³.

Existen tres grandes isotipos de anticuerpos en gallinas: i) una molécula de alto peso molecular tipo IgM; ii) dos subclases, 7 y 8, del tipo IgG, que constituyen la mayor cantidad de inmunoglobulinas en el suero sanguíneo, y finalmente iii) una del tipo IgA que se encuentra en las secreciones externas como la vesícula biliar y el oviducto ^4,5 Estas inmunoglobulinas pueden ser cuantificadas mediante técnicas serológicas, cuyos valores pueden brindar información útil del estado sanitario aviar, para la toma de decisiones en distintos sistemas de producción.

En este sentido, obtener resultados confiables de estudios serológicos depende de procedimientos bien elaborados y ejecutados siendo la extracción de sangre el primer paso fundamental para obtener posteriormente una muestra de suero de calidad, seguido con un buen manejo, transporte, conservación hasta su estudio ⁶. Finalmente, la calidad de esta muestra depende, a su vez, del desarrollo de una plataforma cuidadosamente optimizada y estandarizada en el laboratorio ⁷.

En este sentido la presente investigación tuvo como objetivo evaluar la relación entre título de anticuerpos en función al tiempo de almacenamiento en refrigeración en suero sanguíneo de pollos comerciales.

MATERIALES Y MÉTODOS

Fueron estudiados 15 pollos de la línea genética Cobb500 de 4 semanas de edad y escogidos aleatoriamente de la granja Guayabo Empresa “Alimentos San Joaquín”, ubicada en el distrito de San Joaquín, provincia de ICA (Long: 75º73; Lat: 14º18; 407 m.s.n.m.) antes de ser sacrificados y comercializados.

Para la obtención de suero sanguíneo, inicialmente se tomaron las muestras de sangre en tubos de ensayo a partir de una punción en la vena ala braquial con aguja de calibre 25'' con jeringa de 1 ml en inclinación de 10 - 20° aproximadamente con el bisel hacia arriba ⁸. Las muestras de sangre fueron colocadas con una inclinación de 60° en una caja de fibra de vidrio con hielo para inmediatamente ser encaminadas al laboratorio, finalmente fueron colocadas en la refrigeradora a 4°C para su almacenamiento y para su posterior uso.

Cada pollo fue considerado como unidad experimental. Las unidades experimentales fueron distribuidas aleatoriamente en tres grupos de evaluación, donde el grupo uno (G1) consistió en cinco unidades experimentales a partir de una submuestra aleatoria, así como el grupo dos (G2) y el grupo tres (G3). A partir del suero obtenido de cada una de las unidades experimentales, fue evaluada la cantidad de inmunoglobulinas de acuerdo con el método inhibición de la hemaglutinación (HI) ⁹, para la titulación de anticuerpos con indicador de la enfermedad de New Castle.

Las muestras de suero sanguíneo fueron procesadas en el laboratorio de Patología aviar de la Facultad de Medicina Veterinaria (FMV) de la Universidad Nacional Mayor de la San Marcos (UNMSM), Lima - Perú.

Diseño experimental

Se uso un diseño experimental completamente al azar, donde la variable dependiente fue la titulación de anticuerpos de la enfermedad de New Castle en suero sanguíneo, y los grupos de estudio en función del tiempo, G1, G2 y G3, fueron considerados variables independientes.

Análisis estadistico

Fue utilizado el modelo aditivo lineal: Yij = µ+Gi+eij; donde Yij es el i-ésimo valor de titulación de anticuerpos para New Castle en el j-ésimo grupo de estudio; µ representa el promedio poblacional esperado en función de la observación Yij; Gi representa al i-esimo grupo de estudio en función del tiempo de refrigeración; finalmente, eij representa el efecto aleatorio residual asociado a cada observación.

Para verificar diferencia estadística entre los tiempos de evaluación en la titulación de anticuerpos a partir de suero, fue utilizado un análisis de varianza para variables paramétricas del software estadístico R ¹⁰. Con el mismo paquete estadístico, se procedió a comparar los promedios mediante el análisis de medias de DUNCAN con 5% de confianza en caso de haber sido encontrado efecto significativo entre tratamientos.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

La respuesta del tiempo de refrigeración sobre la cuantificación de anticuerpos del virus para la enfermedad de New Castle en suero sanguíneo de pollos de 4 semanas de vida, no mostró diferencias entre tratamientos (p > 0,05), quiere decir que los exámenes serológicos realizados hasta el día 11 de evaluación almacenados en refrigeración 4°C no altera los valores de cuantificación de anticuerpos para el virus de la enfermedad de New Castle en pollos de engorde.

Como esta evidenciado en la literatura, el suero sanguíneo puede ser almacenado a temperatura de 2ºC hasta 6ºC ya que las moléculas presentes como electrólitos, proteínas y albuminas son moléculas que permanecen estables cuando se almacenan en el rango de tales temperatura ¹¹. Cabe recordar que la desnaturalización de las inmunoglobulinas está dada por procesos que afectan sus propiedades de plegamiento ¹². Por otra parte, investigaciones anteriores han demostrado que la integridad estructural y la estabilidad de las moléculas de inmunoglobulinas IgG son alteradas a altas temperaturas, entre 60 y 70°C, y son sensibles cuando estas se someten a niveles bajos de pH ¹³, así como cuando actúan agentes orgánicos y químicos ^14,15.

Para la inmunoglobulina A, secretado en la saliva, existió disminución de la concentración cuando estas fueron almacenadas a temperaturas bajas de -20°C y -80°C, por un tiempo de 15 días ¹⁶. Investigaciones de proteómica demostraron que algunas proteínas de suero sanguíneo humano sufren alteración con respecto a temperatura de almacenamiento, cuando estas fueron almacenadas a 4°C y a -20°C por mas de 7 días ⁶. Los autores concluyen que es mejor almacenar a -80°C para tiempos prolongados.

Se demostró también que la estabilidad de la hormona polipeptídica insulina compuesta por aminoácidos en suero sanguíneo se mantiene inalterada cuando esta es almacenada en refrigeración a 4°C por un tiempo de hasta de 2 semanas ¹⁷.

Estudios con canes sobre la influencia del tiempo de almacenamiento de las células de defensa como los leucocitos, neutrófilos y linfocitos no presentaron diferencia (p > 0,05) entre los diferentes días de evaluación cuando estas fueron almacenadas a 4°C hasta 96 horas ¹⁸. Por otro lado investigaciones sobre los valores bioquímicos de suero sanguíneo en canes para la enzima alanina-transferasa, no presentaron diferencias cuantitativas (p > 0,05) entre los momentos de evaluación, donde se concluye que las muestras pueden ser almacenadas hasta 60 días a 4°C ¹⁹ así como fue demostrado en otros estudios con urea y creatinina ²⁰, investigación que difiere con resultados de estudios anteriores ²¹ donde se encontró que los compuestos presentes en el suero sanguíneo de humano, como la glucosa y creatinina, pueden cambiar pasando las 24 horas al ser almacenados de 3°C a 5°C.

Ya en suero sanguíneo de bovinos, el tiempo de almacenamiento para moléculas como trigliceridos, albumina, proteínas totales y γ-glutamyle-transferasa (GGT) no presentaron diferencia cuando fueron comparados los diferentes momentos de análisis, hasta 24 horas cuando fueron almacenadas en las condiciones de 4 a 6° C ²².

CONCLUSIÓN

Los resultados obtenidos en el estudio son solo válidos para la enfermedad de New Castle, en tal sentido es recomendado investigar la cuantificación de anticuerpos por más tiempo, así como determinar si existen cambios serológicos para los anticuerpos asociados a tal enfermedad. Por lo tanto, hacer evaluaciones serológicas para el virus de New Castle, es válido hasta los 11 días de almacenamiento a 4°C en pollos de engorde.