Memorias del Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud

Departamento de Patología, Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud, Universidad Nacional de Asunción (UNA): "20 Años de Servicio e Investigación"

Complementary tests for the problem of B and C virus infection diagnosis in blood donors

El objetivo de este trabajo es determinar si las transaminasas hepáticas tienen valor como pruebas complementarias que orienten el diagnóstico de hepatitis B y C, en donantes de sangre con anticuerpos positivos por el método ELISA a estas infecciones virales; teniendo en cuenta que las pruebas confirmatorias como el inmunoensayo recombinante (RIBA) o la prueba de ácidos nucleicos por técnicas moleculares como PCR (RNA HCV) para hepatitis C y DNA viral (PCR) para hepatitis B no se realizan aún en nuestro país debido a sus elevados costos. Se busca sumar esfuerzos en salud pública desde los bancos de sangre debido a la trascendencia de llegar a un diagnóstico en los donantes seropositivos, que hayan sido captados en el tamizaje, para prevenir la propagación de estas hepatitis. Se realizaron pruebas serológicas para hepatitis C, anticuerpos frente al antígeno del core de la hepatitis B y determinaciones de los niveles de GPT o ALT (Transaminasa Glutámica Pirúvica o Alanina Amino Transferasa), GOT o AST (Transaminasa Glutámico Oxalacética o Aspartato Amino Transferasa) en 236 donantes de sangre seropositivos para hepatitis B y C del Banco de Sangre del Hospital de Clínicas de la Universidad Nacional de Asunción-Paraguay. Las transaminasas elevadas fueron clasificadas de acuerdo a los marcadores serológicos positivos para hepatitis B y C, encontrándose niveles elevados en un 13.9% de individuos con anti-HBc, 40% en individuos con anti HCV y 2 de 7 casos en individuos con serología positiva para ambos marcadores serológicos. Casi la mitad de los donantes con marcador serológico positivo para anti HCV presentan elevación de las transaminasas

The aim of this study was to determine if liver transaminases had value as complementary tests to orientate the diagnosis of hepatitis B and C in blood donors with positive antibody to these viral infections by the EIA method, considering that confirmatory tests such as the recombinant immunoassay (RIBA) or nucleic acid test by molecular techniques such as PCR (HCV RNA) for hepatitis C and viral DNA (PCR) for hepatitis B are not performed in our country due to their high costs. We are looking for joining efforts in public health from the blood banks due to the importance of reaching a diagnosis of seropositive donors who have been detected in the screening to prevent the spread of hepatitises. Serologic tests for hepatitis C, antibodies against the core antigen of hepatitis B and determinations of the levels of ALT or GPT (Alanine aminotransferase or Glutamic pyruvic transaminase), AST or GOT (Aspartate aminotransferase or Glutamic oxalacetic transaminase) were carried out in 236 blood donors seropositive for hepatitis B and C of the Blood Bank of the Hospital de Clinicas, National University of Asuncion, Paraguay. Elevated transaminases were classified according to the positive serological markers for hepatitis B and C finding high levels in 13.9% in donors with anti-HBc, 40% in donors with anti HCV and two of seven cases in donors with positive serology for both serological markers. Almost half of the donors with positive serologic marker for anti HCV had elevated transaminases.

Bacterial corneal ulcer: ethiological agents, antimicrobial susceptibility and treatment

La úlcera de córnea bacteriana o queratitis es una condición seria que puede llevar a la pérdida de la visión. La selección del tratamiento se basa en estudios microbiológicos y en el patrón de sensibilidad en un área geográfica determinada. El objetivo de este estudio fue conocer la sensibilidad y la mejor terapia empírica para el tratamiento de pacientes con queratitis bacteriana; de la Cátedra de Oftalmología del Hospital de Clínicas, y cuyas muestras fueron tomadas en el laboratorio de Microbiología del Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Se revisaron las fichas de todos los pacientes con queratitis en cuyos cultivos se aislaron bacterias, desde julio de 2003 a diciembre de 2006. De 175 pacientes con queratitis, se encontró que 73 eran de origen bacteriano, encontrándose más de una bacteria en algunas muestras. De las 87 bacterias,; estafilococos coagulasa negativo (Scn: 27,6%) fueron predominantes, seguido de Staphylococcus aureus (Sau: 11,2%), Streptococcus pneumoniae (Spn: 10,3%), Pseudomonas aeruginosa (Pae: 12,6%) y Acinetobacter sp Ac - 8%). El 100% de los aislados de Scn y Sau, fue sensible a ciprofloxacina y a oxacilina, 89% y 100% a gentamicina, 80% y 88% a tobramicina, respectivamente. Todos los aislados de Spn fueron sensibles a eritromicina, de igual manera todos los aislados de Pae y Ac- a ciprofloxacina y tobramicina; 73% y 100% a gentamicina, respectivamente. El 93% de los pacientes recibió tratamiento empírico de colirio antibiótico reforzado (CAR) de cefazolina 50 mg/ml y gentamicina 16mg/ml; y 7% ciprofloxacina al 0,3%. En esta serie, para las úlceras de córnea debidas a estafilococos y a bacilos gramnegativos no fermentadores, la droga de elección es la ciprofloxacina, y debida a S. pneumoniae, eritromicina. En base a los datos obtenidos se concluye que la combinación de cefazolina y ciprofloxacina es un esquema terapéutico empírico que puede ser recomendado para las queratitis bacterianas.

Bacterial corneal ulcer or keratitis is a serious condition that can lead to visual loss. Treatment selection is based on microbiologic studies and in susceptibility pattern of the especific geographical area. The objective of this study was to determine the susceptibility and best empirical treatment of patients with bacterial keratitis of the Chair of Ophthalmology of the Hospital de Clinicas whose samples were collected in the Microbiology Laboratory of the Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. A retrospective review of the medical records of all culture-positive bacterial keratitis seen from July 2003 to December 2006 was performed. Out of 175 patients with keratitis 73 were found to be of bacterial ethiology. Of the 87 bacteria, coagulase-negative staphylococci (Scn: 27.6%) was predominant followed by Staphylococcus aureus (Sau: 11.2%), Streptococcus pneumoniae (Spn: 10.3%), Pseudomonas aeruginosa (Pae: 12.6%) and Acinetobacter sp (Ac- 8%). All Scn and Sau isolates showed susceptibility to ciprofloxacin and oxacillin, 89% and 100% to gentamicin and 80% and 88% to tobramycin, respectively. All Spn isolates were susceptible to eritromicin; all Pae and Ac- isolates were susceptible to ciprofloxacin and tobramycin, 73% and 100% to gentamicin, respectively. Ninety three percent of the patients received an empirical treatment with a reinforced antibiotic eyedrops of cefazolin 50 mg/ml and gentamicine 16mg/ml; and 7% with ciprofloxacine 0.3%. In this series, for the corneal ulcer due to Staphylococcus species and non-fermenting Gram-negative rods, the drug of choice is ciprofloxacin and for S. pneumoniae is eritromicin. Based in the results of this study, it can said that cefazolin and ciprofloxacin combination is an empirical therapeutic scheme that could be recommended for bacterial keratitis.

Prevalence of serologic markers for viral hepatitis in a selected population: Experience of a university service. Years 2000-2007

En la actualidad se describen varios agentes virales causantes de hepatitis, entre los más comunes están VHB, VHA, VHC, VHD, VHE, cada uno de ellos con diferentes modos de transmisión, tiempo de incubación y patrones clínicos. El objetivo de este estudio fue determinar la prevalencia de marcadores virales de hepatitis en una población con sospecha clínica de hepatitis durante el periodo 2000 a 2007. En este estudio observacional descriptivo de corte transverso, fueron estudiados 756 pacientes de 1 a 88 años de edad, con una edad promedio de 36±17 años, que concurrieron al Departamento de Inmunología del IICS del 2000 al 2007, a quienes se solicitó, en ocasiones, el dosaje de dos o más marcadores virales. Todas las determinaciones serológicas fueron realizadas por el método de ELISA (Human-Alemania, Adaltis-Italia). El 4,5 % (28/617) tenian HBsAg (+), el 23,4% (11/47) anticuerpos antiBHs (+), el 17,3% (9/52) Ac anti HBcore(+), 37,9% (52/137) Ac anti-VHA de tipo IgM(+) y el 6,6%(11/166) anti-VHC. Coinfección de VHB y VHA en 1 individuo y de VHC y VHA en 1 individuo.El marcador viral más solicitado fue el de HBsAg, los datos obtenidos indican una endemicidad intermedia. En esta población estudiada se destaca la elevada prevalencia de anticuerpos IgM contra el virus de la hepatitis A, (característicos de la etapa aguda), lo cual coincide con que nuestro país pertenece a una zona de alta endemicidad para esta infección viral. Se desea hacer notar la necesidad de monitorear las hepatitis virales, sobre todo aquellas inmunoprevenibles, de modo a evitar el desarrollo de enfermedades crónicas que afecten la calidad de vida del individuo.

Currently, several viral agents are described as causative agents of hepatitises being the most common HBV, HAV, HCV, HDV and HEV. Each one of them has different transmission cycles, incubation periods and clinical patterns. Our objective was to determine the prevalence of viral markers of hepatitis in a population with clinical suspicion of hepatitis from 2000 to 2007. In this observational descriptive study, 756 patients, to whom the dosage of two or more viral markers had been requested occasionally, that attended the Immunology Department of the Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud from 2000 to 2007 were studied. The patients were 1 to 88 years old with an average age of 36±17 years. All the serologic determinations were performed by ELISA methodology (Human - Germany, Adaltis - Italy). The 4.5% (28/617) had HbsAg (+), 23.4% (11/47) had anti-HBs antibodies (+), 17.3% (9/52) had anti-HBcore (+), 37.9% (52/137) had anti-HAV IgM (+) and 6.6% (11/166) had anti-HCV (+). Co-infection of HBV and HAV in one patient and of HCV and HAV in another patient were found. The most requested viral marker was HBsAg and the data obtained indicate an intermediate endemic status. In this population the high prevalence of IgM antibodies against hepatitis A virus (characteristic of acute phase) stands out. This finding agrees with the consideration of our country as a highly endemic zone. This study remarks the necessity of monitoring viral hepatitis, specially the immunopreventable ones in order to avoid the development of chronic diseases affecting the quality of life.

Child ocular trauma affecting visual acuity in patients of the Hospital de Clínicas: frequency, management and final visual result

El objetivo de este trabajo es determinar la frecuencia del traumatismo ocular infantil con afectación de la agudeza visual (AV), manejo de urgencia y relación entre la AV al momento de la consulta y luego de un mes de evolución. Se realizó un estudio observacional, descriptivo, con 318 pacientes menores de 16 años, de ambos sexos, que acudieron al servicio de Oftalmología del Hospital de Clínicas, entre setiembre de 2006 y julio de 2007. De los pacientes que consultaron por traumatismo ocular con afectación de la agudeza visual se analizaron datos demográficos, agente causante del trauma, circunstancia, lugar donde se produjo el accidente, tiempo de evolución, AV, tipo de trauma, zona afecta y tratamiento de urgencia. De los 318 niños que consultaron al departamento de urgencias del servicio durante el periodo de estudio, 101 (31,7%) lo hicieron por traumatismo ocular. De éstos, 55 (54,5%) presentó disminución de la agudeza visual. El trauma fue cerrado en el 85,5% de los pacientes y abierto en el 14,5%. Los principales agentes causantes del trauma fueron rama de plantas, palo, piedra, explosivos, alambre y varilla de hierro. La AV al mes de la primera consulta mejoró en el 83,5% de los casos, permaneció igual en el 14,5% y empeoró en el 2%. Existe una relación directa entre AV inicial y AV al mes de la primera consulta (p= 0,01), y una relación inversa entre el tiempo de evolución y la AV al mes (p= 0,013).El traumatismo ocular infantil es un motivo de consulta frecuente en los servicios de urgencia oftalmológica. La AV inicial y el tiempo de evolución constituyen factores pronósticos de la AV final en estos pacientes.

The objective of this work was to determine the frequency of child ocular trauma affecting visual acuity (VA), management of urgencies and relation between the VA at the time of the consultation and after one month of evolution. This was an observational descriptive study of 318 patients, girls and boys under 16 years who attended the Ophthalmology Service of the Hospital de Clínicas from September, 2006 to July, 2007. The following data of the patients that consulted for eye trauma affecting their visual acuity were analyzed: demographic data, causative agent of the trauma, circumstances, place of accident, time of evolution, VA, trauma type, affected zone and urgency treatment. A total of 318 children consulted the urgency department of the service and 101 (31.7%) of them consulted for eye trauma. Of these, 55 (54.5%) showed a decrease of the visual acuity. The trauma was closed in 85.5% patients and open in 14.5%. The main causative agents of trauma were tree branches, sticks, stones, explosives, wires and iron rods. After one month of consultation, VA improved in 83.5% of the cases, remains equal in 14.5% and worsened in 2%. There was a direct relation between the initial VA and the VA at one month (p = 0.01) and an inverse relation between time of evolution and the VA at one month (p = 0.013). The child eye traumatism is a frequent reason of consultation in the ophthalmic urgency services. The initial VA and the time of evolution are prognosis factors of the final VA of these patients.

Immunohistochemistry in the diagnosis of yellow fever: Experience in the Department of Pathology, Health Sciences Research Institute and the Department of Pathology, Faculty of Medical Sciences, National University of Asuncion

La fiebre amarilla (FA) es una enfermedad hemorrágica aguda, inmunoprevenible producida por un arbovirus cuyo órgano blanco es el hígado. Se presenta en forma epidémica y en dos formas epidemiológicas: la urbana y la selvática, ambas con características clínicas e histopatológicas semejantes. Para el diagnóstico se utilizan distintos métodos como serología, cultivo celular, biología molecular, histopatología e inmunohistoquímica (IHQ). La IHQ identifica, en las muestras obtenidas postmortem, la presencia, a nivel tisular, del antígeno viral causante de la enfermedad mediante una unión antígeno-anticuerpo altamente específica. El objetivo de este estudio fue determinar por IHQ la presencia del antígeno del virus de la FA en tejidos hepáticos de pacientes fallecidos con sospecha de FA en el Paraguay. Estudio descriptivo en muestras de tejido hepático (bloques de parafina) obtenidos postmortem, con autorización de los familiares, de 4 pacientes fallecidos con sospecha clínica de FA. Los bloques de parafina fueron enviados, codificados para respetar la confidencialidad de los pacientes, por la Cátedra de Anatomía Patológica de la Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad Nacional de Asunción (UNA) al Dpto. de Patología del Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud (IICS-UNA) para el análisis por IHQ. Se utilizó el anticuerpo primario anti-fiebre amarilla y la técnica del complejo avidina-biotina-peroxidasa, se agregaron cortes de control positivo y negativo para cada caso. Todas fueron positivas para FA. La positividad de la tinción se evaluó por microscopía óptica y en relación a los hallazgos histopatológicos, se consideró positivos aquellos casos en los que se observó una tinción marrón en el citoplasma de las células hepáticas. La positividad se observó en todos los casos sospechosos y en los controles positivos. Los controles negativos no presentaron esta tinción. La IHQ en conjunto con otras técnicas laboratoriales y los criterios clínicos contribuye al diagnóstico postmortem en los casos de FA, y se constituye en una herramienta de diagnóstico muy útil que permite realizar el diagnóstico retrospectivo, en los casos que no ha sido posible realizar otros estudios.

Yellow fever (YF) is an acute hemorrhagic disease, which is immuno-preventable, caused by an arbovirus whose target organ is the liver. It occurs epidemically and in two epidemiological forms: urban and wild, both with clinical and histopathological similar characteristics. Several methods are used for the diagnosis such as serology, cell culture, molecular biology, histopathology and immunohistochemistry (IHC). The IHC determines the presence of the viral antigen causing the disease at tissue level in post-mortem samples through a highly specific antigen-antibody binding. The objective of this study was to determine the presence of the YF viral antigen by IHC in the liver tissue of deceased patients with suspicion of YF in Paraguay. This is a descriptive study carried out on liver tissue samples (paraffin blocks), obtained post-mortem with the permission of the relatives, of four patients that died and had clinical suspicion of YF. Paraffin blocks were sent, coded to respect the patient confidentiality, by the Department of Pathology of the Faculty of Medicine-National University of Asunción (UNA) to the Department of Pathology of the Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud (IICS-UNA) to be analysed by IHC. The anti-yellow fever primary antibody and the technique of avidin-biotin-peroxidase complex were used. Also, samples of positive and negative controls for each case were added. Positive staining was evaluated by optical microscopy, and in relation to the histopathological findings those with a brown staining in the cytoplasm of the hepatic cells were considered positive. Positivity was observed in all suspected cases and positive controls. The negative controls did not show any staining. The IHC techniques together with other laboratory techniques and the clinical criteria contribute to postmortem diagnosis in YF cases and represent a useful diagnostic tool which allows the performance of retrospective diagnosis in those cases where other studies could not have been made.

Study of Yellow Fever in primates in outbreaks areas of the departments of San Pedro and Central in Paraguay

La Fiebre Amarilla (FA) es una de las más importantes zoonosis que afecta a poblaciones humanas. La FA silvestre es imposible de ser erradicada, manteniéndose activa en zonas tropicales en África y Sudamérica. Todas las especies de primates son susceptibles y se consideran reservorios en el medio silvestre. La mortalidad es baja, se desconoce su valor con precisión, sin embargo existen epizootias con alta mortalidad, en humanos varía entre 20-50%. El objetivo de este trabajo fue buscar evidencias de FA en primates capturados en áreas de brote de FA de los departamentos de San Pedro y Central del Paraguay mediante la técnica de Neutralización por reducción de placas para FA cepa vacunal 17 D. Los resultados en los 35 primates estudiados fueron negativos, quizás por lo tardío del momento en la toma de muestras y bajo número de primates capturados.

Yellow Fever (YF) is one of the most important zoonotic diseases affecting human population. It is impossible to eradicate wild YF remaining active in tropical zones of Africa and South America. All species of primates are susceptible and are considered reservoirs in wild regions. Mortality is low and its precise value is unknown though there are epizootics with high mortality rates and in humans varies between 20-50%. The objective of this study was to search for evidence of YF in primates caught in YF outbreaks areas of the departments of San Pedro and Central in Paraguay through the neutralization technique by plates reduction for YF vaccine strain 17 D. The results in the 35 primates studied were negative, perhaps because of the lateness of the time sampling and the low number of captured primates.

Typing of human papilloma virus in cervical samples of fifteen women that attended the National Institute of Cancer in December, 2007

El cáncer de cuello uterino es la segunda neoplasia maligna en la población femenina a nivel mundial siendo el virus de papiloma humano (HPV) la causa principal. El objetivo de este estudio preliminar fue determinar el tipo de HPV en mujeres atendidas en el Instituto Nacional del Cáncer en Diciembre del 2007, por amplificación de cadena de la polimerasa asociado a digestión por enzimas de restricción (PCR-RFLP) y observar la frecuencia de otros factores de riesgo asociados al cáncer. HPV fue detectado en 14 de 15 mujeres con resultados anormales de citología y/o colposcopía. Ocho de las 14 mujeres fueron positivas para HPV de alto riesgo-HR HPV (tipos 16, 31, 58, 33, 45), presentando 6 de las 8 mujeres resultados de biopsia de neoplasia intraepitelial cervical I y III (CIN I y CIN III). Se observó un caso de infección múltiple con los tipos de HR-HPV 33 y 45. Fueron observados 7 casos con falta de concordancia entre los resultados de citología, colposcopía y biopsia, en los cuales la detección de tipos de HR-HPV contribuyó a identificar las mujeres con mayor riesgo de desarrollar CIN. Se observó en algunos casos la presencia de otros factores de riesgo para CIN, como el consumo de cigarrillo por 10 y 30 años y el uso de anticonceptivos orales por 20 años. En conclusión, los resultados preliminares sugieren que la detección de tipos de HPV por PCR-RFLP puede ser útil para orientar el manejo del paciente.

Cervical cancer is the second malignant neoplasia in women population worldwide being the human papilloma virus (HPV) the main causative agent. The aim of this preliminary study was to determine the type of HPV in women that attended the National Institute of Cancer in December, 2007 by polymerase chain reaction associated with restriction enzymes digestion (PCR-RFLP) and to observe the frequency of other risk factors associated with cancer. HPV was detected in 14 of 15 women with abnormal results of cytology and/or colposcopy. Eight of 14 samples were positive for high risk HPV-HR HPV (types 16, 31, 58, 33, 45) and 6 of these women showed biopsy results of I and III cervical intraepithelial neoplasias (CIN I and CIN III). A case of multiple infections with 33 and 45 HR-HPV types was observed. In seven cases, a lack of concordance between the results of cytology, colposcopy and biopsy was observed. In these cases, the detection of HR-HPV types contributed to identify women with higher risk of developing CIN. In some cases, the presence of other risk factors for CIN was observed such as smoking for ten and thirty years and the use of oral contraceptives for twenty years. In conclusion, the preliminary results obtained suggest that the detection of HPV types by PCR-RFLP can be useful to orientate the management of the patient.

Infradiaphragmatic pulmonary sequestration combined with cystic adenomatoid malformation

El secuestro pulmonar (SP) es raro, es la presencia de tejido pulmonar no unido al resto del pulmón pudiendo ser intralobar o extralobar (más común). El diagnóstico definitivo de una masa abdominal superior fetal sólo puede hacerse después del nacimiento, tras una serie de revisiones ultrasonográficas o de imágenes. Presentamos caso clínico de primigesta, 34 años. Ecografía en la 17ª semana: imagen multiquística de 15 mm de diámetro en polo superior del riñón izquierdo fetal. Cariotipo fetal tras amniocentesis: 46 XX. Ecografía en la 20ª semana: ausencia de otras alteraciones estructurales. Ecografía en la 33ª semana: imagen multiquística de 20 mm de diámetro, independiente del riñón. Se sugiere diagnóstico de neuroblastoma suprarrenal izquierdo. En la 39ª semana: nacido de 3160 gramos, Apgar de 9/10, sin complicaciones. Ecografía neonatal: tumoración mixta de predominio líquido de 3 cm de diámetro sobre el riñón izquierdo pero independiente. Resonancia magnética: masa adrenal izquierda compatible con neuroblastoma. Al 36º día de vida: laparotomía subcostal izquierda, riñón y glándulas suprarrenales izquierdas normales, comprimidos por tumor quístico de 3 x 2,5 cm, semisólido, adherido al diafragma. Extirpación completa. Diagnóstico anatomopatológico: secuestro pulmonar infradiafragmático con cambios de malformación adenomatoidea congénita de tipo II. Los tumores abdominales constituyen el 5 % de las anormalidades detectadas en ecografía prenatal. El diagnóstico diferencial incluye neuroblastoma, hemorragia adrenal, tumores renales, teratomas y secuestro pulmonar extralobar intraabdominal (SPEI). El SPEI constituye el 2 a 5 % de los secuestros pulmonares y tiene una alta incidencia de coexistencia con MAQC tipo II.

The pulmonary sequestration (SP) is rare and characterized by the presence of pulmonary tissue not joined to the rest of the normal lung. It could be intralobar or more commonly extralobar. The definite diagnosis of a fetal upper abdominal mass can be made only after birth and following a series of ultrasonographic or image exams. We present the clinical case of a primipara of 34 years old. A 17th week ultrasound showed a multicystic image of 15 mm diameter in the upper pole of the fetal left kidney. The fetal cariotype after amniocentesis was 46 XX. The 20th week ultrasound showed the absence of other structure alterations. The 33th week ultrasound showed a multicystic image of 20mm diameter separated from the kidney. A diagnosis of left adrenal neuroblastoma is suggested. The labor occurred at 39th week with a newborn of 3,160 grams, Apgar of 9/10 without complications. The neonatal ultrasound revealed a mixed tumor of liquid predominance of 3 cm diameter above but independent from the left kidney. A magnetic resonance imaging showed a left adrenal mass compatible with a neuroblastoma. At the 36th day of life, a left subcostal laparotomy showed a normal left kidney and left suprarenal glandules compressed by a semisolid cystic tumor of 3 x 2.5 cm adhered to diaphragm. A complete extirpation was carried out and the anatomopathological diagnosis showed an infradiaphragmatic pulmonary sequestration combined with a type II cystic adenomatoid malformation. Abdominal tumors represent 5 % of the abnormalities detected in prenatal ultrasound. The differential diagnosis includes neuroblastoma, adrenal hemorrhage, kidney tumors, teratomas and intraabdominal pulmonary sequestration (IPS). The IPS constitutes 2 to 5 % of the pulmonary sequestration and has a high frequency of coexistence with type II cystic adenomatoid malformation.

Maintenance and titration of dengue virus for the obtainment of viral antigens

El dengue es un grave problema de salud pública que no posee vacuna ni tratamiento específico. El método de diagnóstico más utilizado es el serológico, específicamente, la detección de anticuerpos IgM anti-dengue. Los antígenos virales utilizados en este método pueden ser preparados en cultivo de células de Aedes albopictus (C6/36). El objetivo de este trabajo fue el mantenimiento de los cuatro serotipos virales (D1 (RIO), D2 (RIO), D3 (H-87), D4 (BV)) en células C6/36 para la futura preparación de antígenos virales. Las células C6/36 fueron cultivadas en medio L-15 con 10% de SFB a 28ºC, e infectadas con 50 ml de cada uno de los serotipos virales por 5 a 7 días. Una vez confirmada la infección por inmunoflurescencia indirecta, los virus fueron titulados por la técnica de placa de lisis. Los títulos de los serotipos fueron D1 (RIO) (2,9 x 106 PFU/ml), D2 (RIO) (4,4 x107 PFU/ml), D3 (H87) (6,4 x 107 PFU/ml) y D4 (BV) (5,1 x106 PFU/ml). La producción de antígenos virales es de gran importancia dado que los mismos pueden ser utilizados en diversos métodos diagnósticos.

Dengue is a serious public health problem that has neither vaccine nor specific treatment. Serology is the most frequently used diagnosis method, specifically the anti-dengue IgM detection. The viral antigens employed in this method could be prepared from Aedes albopictus cell cultures (C6/36). The objective of this study was to maintain the four viral serotypes (D1 (RIO), D2 (RIO), D3 (H-87), D4 (BV)) on C6/36 cells for the preparation of viral antigen in the future. The C6/36 cells were cultured in L-15 medium supplemented with 10% FCS, infected with 50 µl of each viral serotype and then incubated for 5-7 days at 28ºC. After confirmation of the infection by indirect immunofluorescence (IIF), viral titration was performed by lysis plaque assay. The serotypes titres obtained were as follows: [2.9 x 106 PFU/ml] for D1 (RIO), (4.4 x107 PFU/ml) for D2 (RIO), (6.4 x 10 7 PFU/ml) for D3 (H87) and (5.1 x106 PFU/ml) for D4 (BV). The production of viral antigens is very important because they could be used in several diagnosis methods.